白色念珠菌誘導(dǎo)ECV304細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、目的：通過(guò)提取白色念珠菌刺激成分與ECV304細(xì)胞相互作用，觀察其對(duì)細(xì)胞增殖的影響，以解析白色念珠菌的致病性，以期揭示口腔念珠菌性白斑的發(fā)病機(jī)理。方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)模擬人口腔粘膜上皮細(xì)胞。培養(yǎng)白色念珠菌并提取白色念珠菌的上清液和滅活菌液，無(wú)菌驗(yàn)證后白色念珠菌刺激成分實(shí)驗(yàn)分組(上清液組、滅活菌液組、上清液和滅活菌液混合組)與ECV304細(xì)胞共培養(yǎng)。本課題具體從以下四個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究探索：1、通過(guò)倒置顯微鏡觀察白色

2、念珠菌上清液和滅活菌液對(duì)ECV304細(xì)胞密度變化的影響；2、通過(guò)MTT比色實(shí)驗(yàn)測(cè)定白色念珠菌刺激成分對(duì)ECV304細(xì)胞增殖的影響；3、通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定白色念珠菌刺激成分對(duì)ECV304細(xì)胞增殖的影響；4、通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定白色念珠菌刺激成分對(duì)ECV304細(xì)胞周期的影響。
　　 結(jié)果：倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)4倍稀釋的白色念珠菌上清液實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞密度明顯增高；而4倍稀釋的白色念珠菌滅活菌液實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞密度與對(duì)照組相比則無(wú)顯著差異。MTT比

3、色實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)4倍稀釋的白色念珠菌上清液實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞OD值與對(duì)照組相比差異最為顯著。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線揭示在相同濃度、不同時(shí)間的培養(yǎng)條件下，隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，不同組分對(duì)細(xì)胞促增殖影響基本呈正相關(guān)，以上清液組在作用48h時(shí)促增殖作用最為明顯；流式細(xì)胞術(shù)研究發(fā)現(xiàn)上清液和滅活菌液分別作用細(xì)胞40h后，上清液組細(xì)胞S期、G2/M期所占百分比顯著升高，反映細(xì)胞增殖活力指數(shù)PI增高，與對(duì)照組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。而滅活菌液組的PI值無(wú)顯著性差