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文檔簡(jiǎn)介
1、腦血管病是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的一組疾病,致死率和致殘率高,給社會(huì)造成巨大的負(fù)擔(dān)。在世界范圍內(nèi),腦血管病是引起死亡的第二位原因,在我國(guó)各城市卒中死亡人數(shù)己躍居各種死因的首位。因此,腦血管病的基礎(chǔ)和臨床研究始終是醫(yī)學(xué)研究的主要課題。
以往認(rèn)為成熟神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)細(xì)胞是終極細(xì)胞,受損后不能再生,而目前越來(lái)越多的證據(jù)表明腦有自身修復(fù)功能,成年腦室管膜下區(qū)(subventricularzone,svz)、海馬齒狀回顆粒下區(qū)(subgra
2、nularzone,SGZ)等區(qū)域存在具有自我更新和多種分化潛能的神經(jīng)干細(xì)胞。腦缺血可誘導(dǎo)內(nèi)源性干細(xì)胞的增殖、分化,但因數(shù)量少,由此而誘導(dǎo)的自身修復(fù)能力有限。神經(jīng)干細(xì)胞移植雖然為缺血性損傷的治療帶來(lái)生機(jī),但倫理、來(lái)源、移植損傷和排斥反應(yīng)等因素限制了其臨床應(yīng)用。骨髓干細(xì)胞動(dòng)員是新興的細(xì)胞移植方法,利用細(xì)胞因子使主要位于骨髓中的干細(xì)胞進(jìn)入外周血,通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)損傷組織以達(dá)到細(xì)胞移植的目的。
粒細(xì)胞集落刺激因子(granulo
3、cytecolony-stimulatingfactor,G-CSF)是骨髓干細(xì)胞強(qiáng)有力的動(dòng)員劑,可以大大提高外周血干細(xì)胞數(shù)量,且可向腦缺血部位遷移,在腦缺血的特定病理環(huán)境中向神經(jīng)細(xì)胞分化,以修復(fù)受損腦組織,并且還有抗炎癥和抗凋亡,從而起到神經(jīng)保護(hù)作用。
第一部分粒細(xì)胞集落刺激因子在大鼠局灶性腦缺血中的抗凋亡作用
目的:探討重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大鼠局灶性腦缺血中的抗凋亡作用。方法:用線(xiàn)
4、栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈缺血/再灌注(MCAO/R)模型,觀(guān)察rhG-CSF對(duì)神經(jīng)功能缺損評(píng)分及梗死體積的影響,用半定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法測(cè)定腦缺血區(qū)半胱天冬酶-3(Caspase-3)mRNA的表達(dá),并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)缺血區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡率。結(jié)果與對(duì)照組相比,rhG-CSF治療組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分明顯降低,梗死體積縮小,治療組腦缺血區(qū)Caspase-3mRNA表達(dá)降低,凋亡率下降。結(jié)論rhG-CSF可縮小梗死體
5、積,降低Caspase-3mRNA表達(dá),并降低神經(jīng)細(xì)胞凋亡率,rhG-CSF在缺血/再灌注損傷中有抗凋亡作用。
第二部分粒細(xì)胞集落刺激因子在大鼠局灶性腦缺血中的抗炎癥作用
目的探討重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大鼠局灶性腦缺血中的抗炎癥作用。方法用線(xiàn)栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈缺血/再灌注(MCAO/R)模型,用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定腦缺血區(qū)及周邊髓過(guò)氧化物酶(MPO)的表達(dá),并用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈
6、式反應(yīng)(RT-PCR)方法測(cè)定腦缺血區(qū)白介素-1β(IL-1β)mRNA和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)mRNA的表達(dá)。結(jié)果與對(duì)照組相比,rhG-CSF治療組缺血區(qū)MPO的表達(dá)與對(duì)照組沒(méi)有區(qū)別,而治療組腦缺血區(qū)IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表達(dá)明顯降低。結(jié)論rhG-CSF可降低IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表達(dá),在缺血/再灌注損傷中有抗炎癥作用。
第三部分粒細(xì)胞集落刺激因子在大鼠局灶性腦缺血中促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞
7、分化和血管生成作用
目的探討重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大鼠局灶性腦缺血中促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞分化和血管生成作用。方法用線(xiàn)栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈缺血/再灌注(MCAO/R)模型,于再灌注不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)治療組和對(duì)照組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分,并用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定腦缺血區(qū)及周邊巢蛋白(Nestin)、5-溴脫氧尿核苷(Brdu)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)、神經(jīng)元特異性核蛋白(NeuN)和血管性血友病因子(vWF)
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