核苷（酸）類藥物對慢性乙型肝炎患者樹突狀細胞功能的影響.pdf

1、目的：建立從慢性乙型肝炎患者(CHB)外周血分離培養(yǎng)樹突狀細胞(dendritic cell DC)及檢測其表面分子與誘導(dǎo)淋巴細胞增殖能力的方法；研究慢性乙型肝炎患者DC的表面分子的表達及誘導(dǎo)淋巴細胞增殖能力,以及在患者接受了拉米夫定與阿德福韋酯交替治療后,DC功能改變情況。 方法:選取未接受抗病毒治療的CHB患者,從外周血中分離單個核細胞,在含GM-CSF、IL-4、TNF-α的完全培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)為DC,倒置顯微鏡下觀察細胞

2、形態(tài),流式細胞儀檢測其表面分子表達,混合淋巴細胞反應(yīng)(MLR)檢測其刺激淋巴細胞增殖的刺激指數(shù)(SI)。然后抽取10例接受了拉米夫定與阿德福韋酯交替治療CHB患者于治療前及治療52周后,分別抽取外周血分離和培養(yǎng)DC,檢測其表面分子及刺激淋巴細胞增殖的能力,并與正常健康人及拉米夫定耐藥患者的DC功能進行比較。 結(jié)果: 1、CHB患者的外周血單個核細胞,在聯(lián)合應(yīng)用GM-CSF 1000u/ml、IL-4 1000u/ml及T

3、NF-α 1000u/ml下,在體外可誘導(dǎo)出具有典型形態(tài)及生物學(xué)活性的DC。但與正常健康者相比,CHB患者DC突起較少,且具有突起的細胞較少。經(jīng)過拉米夫定與阿德福韋酯交替治療52周后,患者DC形態(tài)有所改善,突起增多。 2、正常健康者、CHB患者抗病毒治療前及拉米夫定與阿德福韋酯交替治療后、拉米夫定耐藥患者的DC存活率分別為(88.51±5.793)％、(82.84±7.588)％、(84.16±9.133)％,(83.68±6.

4、752)％,方差分析得,四組無區(qū)別。 3、CHB患者的DC表面共刺激分子CD80、CD86、HLA-DR的表達分別為(32.16±6.340)％、(36.65±6.867)％、(44.77±8.127)％,與正常健康著相比,明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。經(jīng)過拉米夫定與阿德福韋酯交替治療后患者DC的CD80、HLA-DR表達與治療前相比有所升高,分別為(44.39±5.391)％、(65.02±8.801)％,差異有

5、統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),但與正常健康者相比,仍有所降低(P<0.05);CD86與患者治療前相比有所升高,但無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。拉米夫定耐藥的患者DC表面共刺激分子CD80、CD86、HLA-DR的表達分別為(32.85±8.068)％、(38.34±4.665)％、(45.41±6.752)％與核苷類抗病毒治療前CHB患者相比無差別,與正常健康者相比,明顯降低。 4、CHB患者DC刺激淋巴細胞增殖的刺激指數(shù)(

6、SI)為1.39±0.375,與正常健康者DC的SI相比,明顯低下,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。經(jīng)過拉米夫定與阿德福韋酯交替治療后患者的DC的SI為1.65±0.590,與治療前患者的DC相比,有所提高(P<0.05)。拉米夫定耐藥的患者為1.37±0.392,與CHB患者核苷類抗病毒治療前相比無差別,與正常健康者相比,明顯降低。 結(jié)論:慢性乙型肝炎患者的外周血單個核細胞在聯(lián)合應(yīng)用GM-CSF、IL-4及TNF-α?xí)r可以誘導(dǎo)出

7、具有生物學(xué)活性的DC,但其表面的協(xié)同刺激分子明顯減少,刺激淋巴細胞增殖的能力也明顯低下。表明HBV可以使慢性乙型肝炎患者DC功能降低,這將導(dǎo)致患者的HBV特異Th細胞及CTL細胞不能被有效激活,從而使患者體內(nèi)的HBV不能被有效清除。而得到拉米夫定與阿德福韋酯交替治療52周的CHB患者的DC,其表面協(xié)同刺激分子及刺激淋巴細胞增殖的功能都得到了一定程度的恢復(fù)。說明核苷類抗病毒藥不僅通過抑制逆轉(zhuǎn)錄酶減少病毒載量,而且在長期的抑制病毒復(fù)制后,患