CCNG2在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及與化療關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、膠質(zhì)瘤(Glioma)是包涵星形膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤、少突膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤和室管膜細(xì)胞腫瘤等不同細(xì)胞類型和不同病理等級(jí)的一類神經(jīng)外胚層腫瘤。在全球每年新增的中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)腫瘤中，腦膠質(zhì)瘤最為常見。盡管在手術(shù)和放射治療方面已經(jīng)取得進(jìn)步，但總體預(yù)后仍然較差。近年來化療在惡性膠質(zhì)瘤的治療中逐步受到重視，患者對(duì)于化療的敏感性及耐藥性的差異目前成為研究的重點(diǎn)?；蛐酒芯繛榉治龊Y選差異表達(dá)基因提供了有效的技術(shù)手段，分析驗(yàn)證基因芯片結(jié)果并從中找出真正有臨床意

2、義者需對(duì)每個(gè)基因以及其相關(guān)通路和蛋白進(jìn)行深入的研究。我科教授對(duì)長(zhǎng)征醫(yī)院手術(shù)治療并行基因芯片檢測(cè)的膠質(zhì)瘤病例長(zhǎng)期隨訪，分析芯片數(shù)據(jù)，依據(jù)疾病與相關(guān)基因數(shù)據(jù)庫(kù)，通過生物信息學(xué)技術(shù)篩選出化療相關(guān)的差異表達(dá)基因20余條，細(xì)胞周期蛋白G2(Cyelin G2，CCNG2)即是其中之一。細(xì)胞周期蛋白G2主要作用是阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程。越來越多的證據(jù)提示CCNG2基因可能是一個(gè)重要的抑癌基因，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，并參與部分腫瘤化療的生物學(xué)過程。目前CCNG

3、2在膠質(zhì)瘤中的研究鮮有報(bào)道。為了了解CCNG2在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)情況，及其與患者病理及預(yù)后等臨床特征的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)通過研究臨床病例組織中及TMZ、VM26化療藥物處理前后CCNG2mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化，并利用重組CCNG2慢病毒載體轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞株研究U251細(xì)胞細(xì)胞周期及對(duì)化療藥物敏感性受CCNG2過表達(dá)的影響變化，從而初步探討CCNG2在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展及化療藥物作用等生物學(xué)機(jī)制中所起作用。本實(shí)驗(yàn)共分為兩個(gè)部分：

4、>　　 第一部分、CCNG2在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及臨床意義的研究
　　 目的：比較CCNG2在不同WHO病理級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)水平的差異性，并分析CCNG2表達(dá)水平差異與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的關(guān)系。
　　 方法： qRT—PCR檢測(cè)CCNG2 mRNA在不同等級(jí)腦膠質(zhì)瘤組織的表達(dá)水平。并分析其mRNA轉(zhuǎn)錄水平的差異性與膠質(zhì)瘤病理級(jí)別的相關(guān)性。免疫組化染色檢測(cè)不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤石蠟標(biāo)本中CCNG2蛋白表達(dá)情況。隨訪患者生存

5、時(shí)間，利用Kaplan—Meier及Cox生存分析檢驗(yàn)CCNG2表達(dá)水平同患者預(yù)后的關(guān)系。
　　 結(jié)果： CCNG2在高級(jí)別(WHOⅢ—Ⅳ級(jí))膠質(zhì)瘤組織中mRNA轉(zhuǎn)錄水平明顯下調(diào)，與低級(jí)別(WHOⅠ—Ⅲ級(jí))膠質(zhì)瘤相比差別顯著(P<0．05)。免疫組化法檢測(cè)了腦膠質(zhì)瘤CCNG2的蛋白表達(dá)情況。在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞質(zhì)中可見CCNG2蛋白染色，而且不同病理級(jí)別腦膠質(zhì)瘤的CCNG2的表達(dá)差異顯著，高級(jí)別膠質(zhì)瘤組織陽(yáng)性率低于低級(jí)別組(P<0．

6、05)。Kaplan—Meier生存曲線分析71例星形膠質(zhì)瘤患者生存期，提示CCNG2高表達(dá)患者預(yù)后好于低表達(dá)者，Cox分析提示CCNG2表達(dá)水平可作為膠質(zhì)瘤患者的獨(dú)立預(yù)后判斷因素(p<0．05)。
　　 結(jié)論：CCNG2在腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤存在陽(yáng)性表達(dá)，低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中CCNG2表達(dá)水平明顯高于高級(jí)組。CCNG2蛋白染色陽(yáng)性的膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后較好。
　　 第二部分、CCNG2過表達(dá)對(duì)U251細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響及與化療關(guān)系的

7、實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：研究和探討過表達(dá)CCNG2對(duì)U251細(xì)胞化療敏感性的影響。
　　 方法：應(yīng)用CCNG2慢病毒載體、空載體分別轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，正常培養(yǎng)U251細(xì)胞作為空白對(duì)照。qRT—PCR和Western—blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后加用化療藥物的U251細(xì)胞CCNG2 mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化情況；流式細(xì)胞儀檢測(cè)CCNG2過表達(dá)的U251細(xì)胞株細(xì)胞周期分布情況。MTT法(噻唑蘭比色分析法)檢測(cè)U

8、251中轉(zhuǎn)染前后加用化療藥物后細(xì)胞增殖生長(zhǎng)情況變化。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組U251細(xì)胞和轉(zhuǎn)染空白載體的U251細(xì)胞相比，qRT—PCR和Western blot
　　 結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染重組CCNG2病毒載體的U251細(xì)胞CCNG2 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著增加(P<0．05)。流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布顯示轉(zhuǎn)染CCNG2病毒載體的U251細(xì)胞被抑制在G0/G1期。MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖率發(fā)現(xiàn)，CCNG2過表達(dá)的U251細(xì)胞