FOXJ2在腦膠質(zhì)瘤中的表達及其對膠質(zhì)瘤細胞遷移作用的研究.pdf

1、目的：
　　腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤。包括神經(jīng)外科手術(shù)、放射治療及化療等多模式治療相結(jié)合，但腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后仍然不令人滿意。局部復(fù)發(fā)是治療失敗的主要原因。膠質(zhì)瘤細胞具有侵襲和遷移能力是導致局部復(fù)發(fā)的重要原因。FOXJ2是轉(zhuǎn)錄因子叉頭框（Forkhead box，F(xiàn)OX）蛋白家族成員之一，F(xiàn)OXJ2涉及細胞周期的調(diào)控以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展。已有研究表明FOXJ2表達的上調(diào)可抑制乳腺癌的遷移和侵襲能力。本研究旨在初步了解F

2、OXJ2在腦膠質(zhì)瘤中的表達情況及其與膠質(zhì)瘤患者臨床病例因素的關(guān)系，檢測膠質(zhì)瘤細胞中 FOXJ2、E-鈣黏蛋白（E-cadherin）的表達，分析其相互的關(guān)系以及對膠質(zhì)瘤細胞遷移的影響，探討 FOXJ2的異常表達在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的意義。
　　方法：
　　1.從組織學水平，本研究首先通過Western Blot方法，檢測在兩組人正常腦組織和七組不同級別膠質(zhì)瘤組織中FOXJ2的表達情況；然后，運用免疫組化方法檢測80例膠質(zhì)

3、瘤組織標本中FOXJ2和E-cadherin的表達情況，并采用統(tǒng)計學方法分析FOXJ2、E-cadherin的表達情況與膠質(zhì)瘤患者的年齡、性別、腫瘤位置、大小及腫瘤組織學分級等臨床病理因素之間的相關(guān)性。通過Kaplan-Meier法分析FOXJ2的表達與膠質(zhì)瘤患者的生存率之間的相關(guān)性；
　　2.從細胞分子水平，本研究選取U87MG，U373，H4，A172和U251MG等五種膠質(zhì)瘤細胞株，用Western Blot技術(shù)檢測FOXJ

4、2、E-cadherin和波形蛋白（Vimentin）的表達。選取U87膠質(zhì)瘤細胞株，瞬時轉(zhuǎn)染FOXJ2過表達和干擾質(zhì)粒，通過Western Blot和細胞免疫熒光檢測膠質(zhì)瘤細胞E-cadherin和Vimentin的表達；用劃痕實驗和Transwell遷移實驗檢測細胞遷移能力。明確FOXJ2對膠質(zhì)瘤的遷移的影響。
　　結(jié)果：
　　1. Western Blot及免疫組化結(jié)果均顯示，F(xiàn)OXJ2在膠質(zhì)瘤組織中的表達隨膠質(zhì)瘤病理

5、級別的增高而降低，提示FOXJ2的表達強度與膠質(zhì)瘤組織學分級（P=0.012）之間的關(guān)系有統(tǒng)計學意義，而與患者的年齡、性別、腫瘤體積大小、位置、是否發(fā)生壞死等臨床病理特征間無差異。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示FOXJ2在膠質(zhì)瘤中的低表達患者的總生存率明顯低于FOXJ2高表達的患者（P<0.01）。
　　2. Western Blot技術(shù)檢測U87，U373，H4，A172，U251膠質(zhì)瘤細胞株FOXJ2的表達，結(jié)果顯示

6、FOXJ2在遷移能力弱的H4細胞中表達較高，而在遷移能力強的U251細胞中表達偏低。選取 U87和 U251細胞株，檢測上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）標記，觀察到FOXJ2與E-cadherin表達呈正相關(guān)（r=0.303；P<0.01），Vimentin的表達情況與FOXJ2的表達情況相反。
　　3.通過對轉(zhuǎn)染過表達FOXJ2質(zhì)粒的U87膠質(zhì)瘤細胞，進行Western

7、Blot和細胞免疫熒光檢測，觀察到FOXJ2過表達可促進膠質(zhì)瘤細胞E-cadherin的表達，抑制Vimentin的表達。劃痕實驗和Transwell遷移實驗，觀察到FOXJ2過表達可抑制膠質(zhì)瘤細胞的遷移。
　　4.通過對轉(zhuǎn)染shRNA FOXJ2質(zhì)粒的U87膠質(zhì)瘤細胞，進行Western Blot和細胞免疫熒光檢測，觀察到干擾FOXJ2表達抑制膠質(zhì)瘤細胞E-cadherin的表達，促進Vimentin的表達。劃痕實驗和Trans