FOXJ2在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移作用的研究.pdf

1、目的：
　　腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤。包括神經(jīng)外科手術(shù)、放射治療及化療等多模式治療相結(jié)合，但腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后仍然不令人滿意。局部復(fù)發(fā)是治療失敗的主要原因。膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有侵襲和遷移能力是導(dǎo)致局部復(fù)發(fā)的重要原因。FOXJ2是轉(zhuǎn)錄因子叉頭框（Forkhead box，F(xiàn)OX）蛋白家族成員之一，F(xiàn)OXJ2涉及細(xì)胞周期的調(diào)控以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展。已有研究表明FOXJ2表達(dá)的上調(diào)可抑制乳腺癌的遷移和侵襲能力。本研究旨在初步了解F

2、OXJ2在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況及其與膠質(zhì)瘤患者臨床病例因素的關(guān)系，檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中 FOXJ2、E-鈣黏蛋白（E-cadherin）的表達(dá)，分析其相互的關(guān)系以及對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移的影響，探討 FOXJ2的異常表達(dá)在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的意義。
　　方法：
　　1.從組織學(xué)水平，本研究首先通過(guò)Western Blot方法，檢測(cè)在兩組人正常腦組織和七組不同級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中FOXJ2的表達(dá)情況；然后，運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)80例膠質(zhì)

3、瘤組織標(biāo)本中FOXJ2和E-cadherin的表達(dá)情況，并采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析FOXJ2、E-cadherin的表達(dá)情況與膠質(zhì)瘤患者的年齡、性別、腫瘤位置、大小及腫瘤組織學(xué)分級(jí)等臨床病理因素之間的相關(guān)性。通過(guò)Kaplan-Meier法分析FOXJ2的表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者的生存率之間的相關(guān)性；
　　2.從細(xì)胞分子水平，本研究選取U87MG，U373，H4，A172和U251MG等五種膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，用Western Blot技術(shù)檢測(cè)FOXJ

4、2、E-cadherin和波形蛋白（Vimentin）的表達(dá)。選取U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染FOXJ2過(guò)表達(dá)和干擾質(zhì)粒，通過(guò)Western Blot和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞E-cadherin和Vimentin的表達(dá)；用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力。明確FOXJ2對(duì)膠質(zhì)瘤的遷移的影響。
　　結(jié)果：
　　1. Western Blot及免疫組化結(jié)果均顯示，F(xiàn)OXJ2在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)隨膠質(zhì)瘤病理

5、級(jí)別的增高而降低，提示FOXJ2的表達(dá)強(qiáng)度與膠質(zhì)瘤組織學(xué)分級(jí)（P=0.012）之間的關(guān)系有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而與患者的年齡、性別、腫瘤體積大小、位置、是否發(fā)生壞死等臨床病理特征間無(wú)差異。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示FOXJ2在膠質(zhì)瘤中的低表達(dá)患者的總生存率明顯低于FOXJ2高表達(dá)的患者（P<0.01）。
　　2. Western Blot技術(shù)檢測(cè)U87，U373，H4，A172，U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞株FOXJ2的表達(dá)，結(jié)果顯示

6、FOXJ2在遷移能力弱的H4細(xì)胞中表達(dá)較高，而在遷移能力強(qiáng)的U251細(xì)胞中表達(dá)偏低。選取 U87和 U251細(xì)胞株，檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）標(biāo)記，觀察到FOXJ2與E-cadherin表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.303；P<0.01），Vimentin的表達(dá)情況與FOXJ2的表達(dá)情況相反。
　　3.通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)FOXJ2質(zhì)粒的U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞，進(jìn)行Western

7、Blot和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)，觀察到FOXJ2過(guò)表達(dá)可促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞E-cadherin的表達(dá)，抑制Vimentin的表達(dá)。劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)，觀察到FOXJ2過(guò)表達(dá)可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移。
　　4.通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)染shRNA FOXJ2質(zhì)粒的U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞，進(jìn)行Western Blot和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)，觀察到干擾FOXJ2表達(dá)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞E-cadherin的表達(dá)，促進(jìn)Vimentin的表達(dá)。劃痕實(shí)驗(yàn)和Trans