版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的: 組織工程陰莖海綿體的構(gòu)建為陰莖缺損的修復(fù)提供了新的選擇??煽康姆N子細(xì)胞、支架及種子細(xì)胞與支架的粘附是組織工程主要內(nèi)容,本實(shí)驗(yàn)以preplate技術(shù)分離昆明小鼠肌源性干細(xì)胞,并鑒定其細(xì)胞表型,為組織工程種子細(xì)胞提供又一選擇,同時(shí)以新西蘭白兔肌源性干細(xì)胞為種子細(xì)胞,兔脫細(xì)胞陰莖海綿體為支架,探索促進(jìn)二者粘附的因素,以纖維連接蛋白(Fibronectin,F(xiàn)n)為重點(diǎn)。 材料與方法: 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物: 昆
2、明小鼠,1周齡;新西蘭大白兔,雌雄不限,體重1.5~2.0Kg,月齡1~1.5個(gè)月。 2.實(shí)驗(yàn)試劑與器材: X Ⅰ型膠原酶;馬血清(HS)、DMEM-LG、Trypsin;dispase:胎牛血清;氨水;Triton-X100:DMSO;MTT;牛血清白蛋白(BSA);顯微外科手術(shù)器械、紫外分光光度計(jì)、流式細(xì)胞儀等。 3.昆明小鼠肌源性干細(xì)胞的分離與鑒定利用Preplate技術(shù)分離MDSC:無(wú)菌條件下取得昆明小鼠
3、雙后肢肌肉并剪成肉泥,依次使用Ⅺ型膠原酶、dispase及胰酶對(duì)組織進(jìn)行消化,得到的細(xì)胞懸液接種入培養(yǎng)瓶,此為PP1;細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育2小時(shí)后將PP1中的懸液轉(zhuǎn)移至經(jīng)膠原包被的培養(yǎng)瓶,此為PP2;隨后每24小時(shí)將懸液轉(zhuǎn)移至膠原包被的培養(yǎng)瓶,此為PP3~PP6。收集PP6細(xì)胞,利用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)其desmin、CD45及Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù);利用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)desmin、Bcl-2表達(dá)。 4.新西蘭兔MDSC的
4、分離培養(yǎng)及脫細(xì)胞陰莖海綿體基質(zhì)的制備: 利用Preplate技術(shù)分離MDSC,利用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)其desmin、CD45及Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù),符合MDSC表型,培養(yǎng)作為種子細(xì)胞。取健康成年雄性新西蘭兔完整陰莖海綿體組織,以Triton-X 100與NH3·H2O混合液進(jìn)行萃取脫細(xì)胞處理。處理后脫細(xì)胞陰莖海綿體基質(zhì)質(zhì)地柔軟,標(biāo)本作病理組織HE染色,鏡下可見主要成份為膠原及彈性纖維,且排列規(guī)則,未見細(xì)胞成份。利用本
5、實(shí)驗(yàn)室已成功的技術(shù)流程分離培養(yǎng)MDSC及制備脫細(xì)胞陰莖海綿體基質(zhì)。 5.Fn影響MDSC與脫細(xì)胞陰莖海綿體基質(zhì)粘附的實(shí)驗(yàn)研究: ①取3塊96孔板分為3組:Fn、BSA及未包被組,前兩種蛋白分別包被孔底,未包被組為對(duì)照。分4個(gè)時(shí)點(diǎn),間隔1h,每孔接種肌源性干細(xì)胞5×104個(gè),MTT檢測(cè);②無(wú)菌條件下將脫細(xì)胞陰莖海綿體基質(zhì)片(約0.5cm2大小)置入12孔板中心,分別予Fn、BSA包被,未包被作為對(duì)照組。接種細(xì)胞懸液,每片接
6、種細(xì)胞數(shù)為1×105個(gè),培養(yǎng)第3天取基質(zhì)片進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT檢測(cè)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: Preplate技術(shù)分離的細(xì)胞中PP1和PP2貼壁細(xì)胞相對(duì)較少,PP3開始即有大量的短梭形、圓形或多角形細(xì)胞貼壁,這些小體積細(xì)胞數(shù)量到PP6時(shí)增至80%。它們極易融合,生長(zhǎng)呈方向性。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示PP6細(xì)胞的desmin、CD45以及Bcl-2的陽(yáng)性率平均為82.6%±0.14%、1.03%±0.07%及77.2%±0.11%免疫細(xì)
7、胞化學(xué)檢測(cè)可見較多的desmin及Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞。 脫細(xì)胞陰莖海綿體基質(zhì)及分離培養(yǎng)的兔MDSC經(jīng)檢測(cè)達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求,可用于實(shí)驗(yàn)。各組隨著時(shí)間的延長(zhǎng),MTT和OD570吸光值增加,組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)比較有顯著性差異。經(jīng)Fn包被組其MTT和OD570吸光值在各時(shí)點(diǎn)均明顯高于預(yù)涂BSA組和對(duì)照組。BSA組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。脫細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行預(yù)處理后再種植肌源性干細(xì)胞,經(jīng)Fn預(yù)處理組,其細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT和OD570吸光值明顯高于BSA處理
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 重組纖維連接蛋白羧基端細(xì)胞結(jié)合域增強(qiáng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞黏附力的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 肌源性干細(xì)胞治療壓力性尿失禁的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- TGF-1促進(jìn)骨骼肌肌源性干細(xì)胞合成膠原纖維的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 可注射性纖維蛋白膠聯(lián)合肌源干細(xì)胞移植治療女性壓力性尿失禁的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 層粘連蛋白增強(qiáng)脫細(xì)胞真皮基質(zhì)支架上骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞粘附力的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 胎兒纖維連接蛋白檢測(cè)的意義
- 自體肌源性干細(xì)胞注射治療壓力性尿失禁的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 肌源性干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 纖維連接蛋白對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞系的增殖、粘附和移行的影響.pdf
- 聯(lián)合重組纖維連接蛋白活化異基因殺傷細(xì)胞過(guò)繼治療腎癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 白介素-10和纖維連接蛋白在索溝損傷中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf
- 纖維連接蛋白誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞的生物學(xué)特性和殺瘤活性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合纖維蛋白和纖維連接蛋白修飾的納米晶膠原基骨修復(fù)骨缺損研究.pdf
- 抑制纖維連接蛋白的合成誘導(dǎo)大鼠系膜細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf
- 纖維連接蛋白粘附共培養(yǎng)對(duì)伊馬替尼誘導(dǎo)慢性髓系白血病細(xì)胞凋亡影響的研究.pdf
- 犬臍血間質(zhì)干細(xì)胞的肌源性分化.pdf
- 肌源性干細(xì)胞的表型研究及體外誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 重組人紅細(xì)胞生成素影響系膜細(xì)胞生長(zhǎng)與纖維連接蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 共同性外斜視內(nèi)直肌超微結(jié)構(gòu)及纖維連接蛋白變化研究.pdf
- 等離子體聚丙烯酸薄膜表面纖維連接蛋白的固定及其內(nèi)皮細(xì)胞粘附行為.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論