大腦神經營養(yǎng)因子促進骨骼肌肌源性干細胞轉化為神經樣細胞的實驗研究.pdf

1、目的： 1．探討骨骼肌源性干細胞體外分離純化、培養(yǎng)、鑒定的方法，研究骨骼肌源性干細胞的生物學特性，為后續(xù)的實驗奠定基礎。 2．評估不同濃度的大腦神經營養(yǎng)因子（BDNF）在體外誘導骨骼肌肌源性干細胞后，肌源性干細胞分化為神經樣細胞的能力；并鑒定分化后的神經樣細胞，為以后的神經組織工程提供種子細胞。 方法： 1．采用Ⅺ型膠原酶和胰蛋白酶二步消化法獲取大鼠骨骼肌肌源性干細胞，微孔尼龍網純化肌源性干細胞后進行體外

2、原代和傳代培養(yǎng)。觀察細胞的形態(tài)，通過生長曲線、細胞融合率等指標研究骨骼肌源性干細胞的增殖與分化能力，利用免疫細胞化學染色和免疫熒光染色對所獲得的細胞進行鑒定。 2．體外提取純度較高的肌源性干細胞后，采用bFGF、EGF誘導肌源性干細胞成細胞球樣細胞團，在貼壁的情況下，用不同濃度的大腦神經營養(yǎng)因子（BDNF）誘導分化，并檢測GFAP的表達。 結果： 1．二步消化法適用于骨骼肌肌源性干細胞細胞的獲取。通過不同直徑的微

3、孔尼龍過濾網（11um，20um，30um，41um）純化骨骼肌肌源性干細胞。在生長培養(yǎng)基作用下，細胞增殖旺盛：在分化培養(yǎng)基條件下，細胞分化良好，可融合成肌管。Desmin和CD34免疫細胞化學染色呈陽性。 2．次代細胞在肌源性干細胞生長培養(yǎng)液中大部分貼壁生長，少數懸浮、成團。懸浮細胞生長較快，7～15 d出現神經球樣細胞團，神經球轉入預涂有多聚賴氨酸的24孔板后，加入不同濃度的BDNF，細胞逐漸貼壁生長，呈多種細胞形態(tài)：兩極長

4、的梭形細胞；有2～3個長突起的多角形細胞；突起多而短的多角形細胞；不規(guī)則形態(tài)細胞再作GFAP免疫組化染色，GFAP（+）。GFAP陽性率隨BDNF濃度的升高而增加。 結論： 1．體外培養(yǎng)的骨骼肌肌源性干細胞具有良好的增殖與分化能力，微孔尼龍網過濾可純化骨骼肌肌源性干細胞?？刂蒲宓臐舛?，可調節(jié)細胞的增殖與分化，骨骼肌肌源性干細胞適用于組織工程和基因治療。 2．BDNF作用于骨骼肌肌源性干細胞，可使細胞向神經樣細胞