益氣活血通絡(luò)湯預(yù)防兔創(chuàng)傷性下肢深靜脈血栓形成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察益氣活血通絡(luò)湯預(yù)防兔創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成對兔血清 p-選擇素、PAF及血管內(nèi)皮形態(tài)的影響，并探討其干預(yù)機(jī)制。
　　方法：32只健康日本大白兔在同樣飼養(yǎng)環(huán)境下適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，并將32只日本大白兔進(jìn)行統(tǒng)一編號，依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表，隨機(jī)分為4組：正常組（A組），模型組（B組）、益氣活血通絡(luò)湯低劑量組（C組），益氣活血通絡(luò)湯高劑量組（D組）。開始造模前一周，A組動(dòng)物進(jìn)行正常飼養(yǎng)；B組動(dòng)物給予7.0ml/kg/d的生理鹽水；C組、D組

2、中藥湯劑持續(xù)灌胃1周，C組實(shí)驗(yàn)兔給予低劑量為7.0ml/kg/d，D組實(shí)驗(yàn)兔給予高劑量為28.0ml/kg/d；開始造模前一天，分別抽取4組實(shí)驗(yàn)兔空腹靜脈血，保存于生化檢驗(yàn)試管中，在離心機(jī)中以3000轉(zhuǎn)/min速度離心6min,取上清液，保存于—20℃低溫冰箱中； B組、C組、D組采用何飛[54]等建立創(chuàng)傷性LDVT動(dòng)物模型的方法來建立模型；造模開始第2天C組、D組進(jìn)行灌胃；A組（正常組)正常飼養(yǎng)；B組（模型組）給予等體積生理鹽水劑量按

3、照進(jìn)行7.0ml/kg/d進(jìn)行；C組：中藥藥液7.0ml/kg/d灌胃；D組中藥藥液28.0ml/kg/d灌胃，灌胃持續(xù)到造模結(jié)束。建模第8天，分別抽取4組實(shí)驗(yàn)兔空腹靜脈血4-6ml，保存于生化檢驗(yàn)試管中，在離心機(jī)中以3000轉(zhuǎn)/min速度離心6min,獲取上清液，保存于—20℃低溫冰箱中，采用ELISA法按照試劑盒說明書對血清P—選擇素、血小板活化因子進(jìn)行檢測，并于第8天進(jìn)行下肢靜脈多普勒彩超檢查,并隨機(jī)抽取 A組、B組、C組、D組實(shí)

4、驗(yàn)兔各1只，麻醉后，解剖獲取造模肢體股靜脈血管并制作病理切片，進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察。數(shù)據(jù)應(yīng)用 SPass17.0軟件分析。
　　結(jié)果：大體情況觀察：開始造模前一周，A組正常喂養(yǎng)，B組給予生理鹽水；C組、D組中藥持續(xù)灌胃；灌胃后，C組、D組實(shí)驗(yàn)兔進(jìn)食水量均有所減少，活動(dòng)量下降，待第二天均恢復(fù)正常；B組1只實(shí)驗(yàn)兔腹瀉，第二天死亡；灌胃過程中C各1只實(shí)驗(yàn)兔灌胃時(shí)出現(xiàn)劇烈的嗆吐，反抗劇烈，呼吸急促，放入飼養(yǎng)籠后蜷縮懶動(dòng)，第二天死亡；至造模前

5、未有實(shí)驗(yàn)兔死亡。造模第1天，B、C、D組麻醉的實(shí)驗(yàn)兔蘇醒后，進(jìn)食量、飲水量明顯下降，活動(dòng)量小，狀態(tài)欠佳，毛色暗淡，警惕性極高；第2天的進(jìn)食水量已恢復(fù)，毛色有光澤，狀態(tài)良好；期間A組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一只出現(xiàn)腹瀉，第二天死亡； C組實(shí)驗(yàn)1只，D組實(shí)驗(yàn)兔2只，由于灌胃失敗，出現(xiàn)劇烈的嗆吐，劇烈反抗，呼吸急促，放進(jìn)飼養(yǎng)籠后，反應(yīng)遲鈍，蜷縮懶動(dòng)，第二天早晨死亡。至造模第八天4組實(shí)驗(yàn)兔未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象；至第八天，B組、C組和D組部分實(shí)驗(yàn)兔腹股溝區(qū)、打擊部位存

6、在不同程度的腫脹；高劑量組未見明顯血腫，低劑量組少部分實(shí)驗(yàn)兔輕度血腫，模型組部分實(shí)驗(yàn)兔腫脹程度偏重。
　　2.P—選擇素、PAF含量:造模前，A組、B組、C組、D組實(shí)驗(yàn)兔血清中P—選擇素（CD62P）及PAF含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；造模后，模型組日本實(shí)驗(yàn)兔血液中P—選擇素含量、PAF含量明顯增高，含量較正常組統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異（P<0.01）；與模型組相比，低劑量組實(shí)驗(yàn)兔血清中P—選擇素（CD62P）、血小板活化因子（

7、PAF）含量降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與正常組相比，低劑量組實(shí)驗(yàn)兔血清中P-選擇素（CD62P）含量相對偏高，差異不具有統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）,血小板活化因子(PAF)含量相對較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；高劑量組實(shí)驗(yàn)兔P—選擇素（CD62P）、PAF含量與模型組相比，含量顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)意義（P<0.01）；與正常組比，二者含量輕度升高，差異不具有統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）；
　　3．彩超檢查結(jié)

8、果：模型組7只實(shí)驗(yàn)兔中，6只實(shí)驗(yàn)兔右下肢股靜脈不完全血栓形成；益氣活血通絡(luò)湯低劑量組6只實(shí)驗(yàn)兔中，有1只實(shí)驗(yàn)兔右下肢股靜脈不完全血栓形成；益氣活血通絡(luò)湯高劑量組6只實(shí)驗(yàn)兔中，有1只實(shí)驗(yàn)兔右下肢股靜脈少量不完全血栓形成；
　　4．病理觀察:正常組血管內(nèi)皮連續(xù)性好，無中斷，缺損，可見血細(xì)胞附著；模型組血管內(nèi)皮損傷嚴(yán)重，連續(xù)性中斷，并伴有大量血管內(nèi)皮的缺損、脫落，且管腔內(nèi)大量血栓填充；低劑量組實(shí)驗(yàn)兔血管部分內(nèi)皮連續(xù)性中斷、缺損，內(nèi)膜形態(tài)

9、比較規(guī)則，有少量血細(xì)胞附著在血管內(nèi)壁；益氣活血通絡(luò)湯高劑量組僅有部分血管內(nèi)皮損傷、脫落，完整性較好，管腔內(nèi)可見少量血細(xì)胞附著血管壁。
　　結(jié)論：
　　1.運(yùn)用創(chuàng)傷固定造模法可以建立創(chuàng)傷性下肢深靜脈血栓模型。
　　2.益氣活血通絡(luò)湯可以有效的預(yù)防創(chuàng)傷性下肢深靜脈血栓形成。
　　3.益氣活血通絡(luò)湯可以保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，抑制 p—選擇素、血小板活化因子（PAF），抑制血小板活化來干預(yù)創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成。
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