偏頭痛相關(guān)microRNA表達(dá)譜及靶向Il-1β的microRNA篩選研究.pdf

1、背景:偏頭痛是一種常見的神經(jīng)血管紊亂疾病，其患病率約為10％-20％左右，為社會(huì)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。其發(fā)病機(jī)制還不十分清楚。三叉神經(jīng)血管反射學(xué)說以及細(xì)胞因子介導(dǎo)的硬腦膜無菌炎癥反應(yīng)是頭痛的主要學(xué)說。白細(xì)胞介素1β(interleukin-1 beta，IL-1β)在偏頭痛大鼠三叉神經(jīng)節(jié)(trigeminal ganglia，TG)中、在偏頭痛患者的外周靜脈血和頸靜脈血中表達(dá)的升高，說明其可能參與偏頭痛的發(fā)病機(jī)制，但是其具體作用機(jī)制尤其是

2、分子機(jī)制還未知。微小RNA(microRNA，miRNA)是一類長(zhǎng)度約為18-25個(gè)核苷酸的小單鏈RNA分子，在轉(zhuǎn)錄后水平通過降解mRNA或抑制其表達(dá)來誘導(dǎo)基因沉默，miRNA參與多種生物過程如細(xì)胞分化和凋亡，以及多種疾病過程如腫瘤、神經(jīng)病理性疼痛和心血管疾病。但目前鮮有偏頭痛相關(guān)miRNA的報(bào)道。
　　目的:探索miRNA在偏頭痛大鼠TG和正常大鼠TG中的表達(dá)差異。并在這些差異表達(dá)的microRNA中初步篩選靶作用于IL-1β的

3、miRNA，探討IL-1β在偏頭痛發(fā)病過程中的分子機(jī)制，為防治偏頭痛尋找新的生物學(xué)標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)。
　　方法:應(yīng)用化學(xué)物質(zhì)重復(fù)刺激大鼠硬腦膜，誘導(dǎo)炎癥，建立偏頭痛大鼠模型。選取雄性Sprague Dawley(SD)大鼠34只，體重約為160-220g，隨機(jī)分為假手術(shù)組和致炎劑(inflammation soup，IS)1d組、2d組和3d組。大鼠行硬腦膜外置管術(shù)?；謴?fù)5天后，IS組分別硬腦膜給予IS10μl/d，假手術(shù)組只行矢

4、狀竇旁硬腦膜下置管術(shù)，余實(shí)驗(yàn)操作同IS組。Western blot檢測(cè)各組大鼠TG中IL-1β的表達(dá)情況。提取假手術(shù)組及IS3d組大鼠TG的RNA進(jìn)行miRNA芯片檢測(cè);四種不同的生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)靶作用IL-1β基因3'UTR區(qū)的miRNA，結(jié)合芯片結(jié)果取交集。篩選5個(gè)交集中的miRNA和3個(gè)上調(diào)的miRNA和進(jìn)行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real time polymerase chain reaction，q

5、RT-PCR)驗(yàn)證。
　　結(jié)果:硬腦膜下置管術(shù)后5d，大鼠眶周痛閾與術(shù)前比無差異(P＞0.05)，硬腦膜給予IS3d后，大鼠眶周痛閾明顯下降(P＜0.05)。與假手術(shù)組比，IS2d和IS3d組大鼠TG中IL-1β表達(dá)是升高的。IS3d組與假手術(shù)組芯片結(jié)果比較共有23個(gè)差異表達(dá)的miRNA（倍數(shù)＞1.5），其中上調(diào)的有17個(gè)，下調(diào)的有6個(gè)。qRT-PCR結(jié)果顯示1個(gè)上調(diào)的miRNA: miR-3560及2個(gè)下調(diào)的miRNA:miR-