胚胎神經干細胞腦出血大鼠腦內移植的運動神經功能改變和形態(tài)學研究.pdf

1、目的： 從E14SD胎鼠前腦分離出神經干細胞，體外培養(yǎng)到一定的數量供細胞移植；在大鼠尾狀核注射膠原酶Ⅳ，制作腦出血模型；將培養(yǎng)成功的神經干細胞進行熒光標記后，移植入腦出血模型大鼠腦內，觀察大鼠腦出血后神經功能的恢復以及移植后分化神經元和膠質細胞的形態(tài)學改變。 方法； 一.參照葉盛的差速離心法培養(yǎng)出神經干細胞，在相差顯微鏡下觀察神經干細胞的生長及分化形態(tài)；nestin免疫熒光方法來鑒定神經干細胞，用map2標記神經

2、元及GFAP標記星形膠質細胞方法來確定神經干細胞的分化能力。 二.使用大鼠立體定向儀在大鼠尾狀核注射膠原酶Ⅳ，制作腦出血模型大鼠；從大體解剖、組織病理及神經功能學三個方面來評價模型：大體標本觀察血腫形態(tài)，HE染色法顯示血腫的分布，對偏癱大鼠進行肢體的功能評價。 三.如上述方法制作的34只腦出血大鼠模型，隨機分為三組，進行神經干細胞移植入腦出血大鼠腦內的實驗研究。 A組：10只為空白組，不移植神經干細胞及培養(yǎng)液。

3、 B組：10只為培養(yǎng)液移植組，在腦出血3天后移植培養(yǎng)液。 C組：14只為神經干細胞移植組，在腦出血3天后移植神經干細胞，移植前用核熒光標記物Hoechst33342標記神經干細胞細胞核(4只通過免疫熒光觀察細胞在大鼠體內生長及分化情況，10只用于肢體功能評價)。 三組大鼠，每組10只，分別在移植前1h，移植后7天，14天，21天， 28天進行神經功能學評分，經統(tǒng)計學分析，判斷神經干細胞在腦出血大鼠腦內移植后

4、是否能促進偏癱肢體功能恢復。 結果: 在培養(yǎng)過程中，觀察到神經干細胞增殖形成大量神經球懸浮生長，nestin免疫熒光標記證實為神經干細胞，經誘導分化后map2或者GFAP和hoechst雙染可見陽性細胞，表明神經干細胞能進一步分化為神經元及星形膠質細胞：膠原酶Ⅳ制作腦出血模型腦內血腫邊界清楚、形態(tài)規(guī)則，肢體功能障礙明顯；hoechst標記的神經干細胞移植入腦出血大鼠后可見其在腦內存活，主要分布于血腫腔周邊，免疫熒光檢測顯

5、示移植細胞能進一步分化為神經元及星形膠質細胞；從移植術后第21天到第28天，神經干細胞移植組大鼠的神經功能改善顯著好于培養(yǎng)液移植組和單純腦出血組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。 結論： 1.用差速離心法能從E14胎鼠前腦皮質中成功分離和培養(yǎng)出有效數量的神經干細胞； 2.膠原酶Ⅳ制作的腦出血大鼠是一種重復性好、穩(wěn)定性佳的腦出血模型； 3.胚胎神經干細胞腦出血大鼠腦內移植能促進偏癱肢體功能恢復； 4