桿狀病毒介導(dǎo)的內(nèi)耳基因治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的] 研究重組桿狀病毒作為內(nèi)耳基因轉(zhuǎn)染載體的可行性及其轉(zhuǎn)染特點(diǎn)。 [方法] 應(yīng)用Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)制備重組桿狀病毒Bac-GFP，以不同MOI的病毒和不同濃度的丁酸鈉轉(zhuǎn)染螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，通過熒光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染率和綠色熒光蛋白表達(dá)強(qiáng)度，并檢測(cè)桿狀病毒和丁酸鈉對(duì)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的毒性。建立新生大鼠耳蝸Corti 器體外模型，加入攜帶報(bào)告基因的病毒懸液,觀察外源基因表達(dá)情況。 [結(jié)果]

2、 桿狀病毒可以高效轉(zhuǎn)染螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,轉(zhuǎn)染效率可以高達(dá)77.69％。Bac-GFP轉(zhuǎn)染率和表達(dá)強(qiáng)度隨著MOI和丁酸鈉濃度的提高而提高。GFP6小時(shí)開始表達(dá)，在第2天表達(dá)量最高。重組桿狀病毒在MOI值為800和丁酸鈉終濃度小于或等于10 mM時(shí)，對(duì)螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞沒有明顯細(xì)胞毒性。耳蝸Corti 器體外培養(yǎng)48小時(shí)后,培養(yǎng)組織生長良好。Bac-GFP聯(lián)合丁酸鈉可以高效轉(zhuǎn)染毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞, 同時(shí)并沒有改變Corti器的正常結(jié)構(gòu)。