荔枝殼原花青素對(duì)apoE基因敲除小鼠肝臟脂質(zhì)代謝紊亂的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究荔枝殼原花青素(Procyanidins extracted from the litchi pericarp,LPPC)對(duì)載脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E-knock out,apoE-KO)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變的保護(hù)作用以及對(duì)肝臟脂代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的影響。探討荔枝殼原花青素通過調(diào)節(jié)肝臟脂代謝紊亂發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　1.雄性C57BL/6小鼠12只,

2、體重18-22g,5周齡;載脂蛋白E基因敲除(apoE-KO)小鼠24只,體重18-22g,5周齡;適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后,將apoE-KO小鼠按體重隨機(jī)分為2組。共分3組:A:control組,B:apoE-KO組,C:apoE-KO+LPPC(100mg/kg/d)組。A組C57BL/6小鼠普通飼料喂養(yǎng),B組和C組apoE-KO小鼠高脂飼料(21％脂肪,0.15%膽固醇)喂養(yǎng)。A組和B組給予超濾凈水器凈化后的水灌胃,C組給予LPPC(10

3、0mg/kg/d)溶液灌胃,實(shí)驗(yàn)為期24w,每周記錄小鼠的進(jìn)水量及進(jìn)食量,每周稱重一次。
　　2.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后收集各組小鼠的血液標(biāo)本,測(cè)定血清中的甘油三酯(triglyceride,TG)和總膽固醇(total cholesterol,TC)水平及谷氨酸丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(glutaminateal aninetransaminase,ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性

4、。分離小鼠腸系膜脂肪,腎周脂肪,睪周脂肪,稱重并計(jì)算脂肪/體重比。分離小鼠主動(dòng)脈血管,取主動(dòng)脈弓石蠟包埋并制作病理切片,行HE(Hematoxylin-Eosin)染色觀察小鼠主動(dòng)脈血管動(dòng)脈粥樣硬化的程度。分離肝臟組織,測(cè)定肝臟中TG和TC的水平,并取部分肝臟組織制作冰凍切片用油紅O染色觀察肝臟脂質(zhì)沉積的情況。
　　3.取小鼠部分肝臟組織,提取組織總RNA,通過實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)肝臟中固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(Sterol r

5、egulatory element binding protein,SREBP-lc),乙酰輔酶A羧化酶(Acetyl CoA carboxylase,ACC),膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(Sterol regulatory element binding protein,SREBP-2),羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA,HMG CoA reductase),三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體

6、A1(ATP-binding cassette transporter-1,ABCA1),肝X受體α(liver X receptorα,LXRα),肝X受體β(liverXreceptorβ,LXRβ),過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator–activated receptorα,PPARα),法尼酯X受體(farnesoid X receptor,FXR),小異源二聚體伴侶受體(small h

7、eterodimer partner,SHP)等基因mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.各組小鼠進(jìn)食進(jìn)水量沒有顯著性差異。apoE-KO組小鼠的體重增長(zhǎng)量顯著性高于對(duì)照組,差異有顯著性(P<0.05)。而LPPC干預(yù)的apoE-KO小鼠較未干預(yù)的apoE-KO組小鼠體重平均下降了7-8g。
　　2.通過主動(dòng)脈弓石蠟切片HE染色觀察,我們發(fā)現(xiàn)apoE-KO組小鼠血管內(nèi)壁有大量粥樣斑塊形成,證明我們動(dòng)脈粥樣硬化模型建

8、立成功。apoE+LPPC組小鼠較apoE-KO組小鼠血管內(nèi)泡沫細(xì)胞聚集和粥樣斑塊沉積的情況得到了良好改善,通過肝臟油紅O染色的結(jié)果發(fā)現(xiàn)LPPC干預(yù)后肝臟脂質(zhì)浸潤(rùn)情況也有所改善。
　　3.與control組小鼠相比,apoE-KO組小鼠血清TC和TG含量顯著性升高(P<0.05),血清ALT和AST水平顯著升高(P<0.05),肝臟TC和TG含量顯著升高(P<0.05)。與apoE-KO組小鼠相比,apoE-KO+LPPC組小鼠血

9、清TC、TG含量,ALT水平明顯下降(P<0.05),AST水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),肝臟TC和TG含量均明顯下降(P<0.05)。
　　4.與apoE-KO組小鼠相比,LPPC干預(yù)組apoE-KO小鼠肝臟PPARα、FXR、SHP、ABCA1、LXRαmRNA表達(dá)水平顯著增加(P<0.05),同時(shí)SREBP-2,HMG-CoA還原酶mRNA的表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)。
　　結(jié)論:荔枝殼原花青素對(duì)apoE