芪藶強心抑制新生大鼠心肌細胞肥大機制的研究.pdf

1、目的:芪藶強心是一種傳統(tǒng)中藥，很長時間以來用于治療慢性心力衰竭。以往的研究以表明芪藶強心可以抑制高血壓或者缺血等應(yīng)激反應(yīng)下的心室重構(gòu)和心肌肥厚。然而，在細胞水平上，芪藶強心是否可以調(diào)節(jié)心肌肥厚以及是否通過肥厚相關(guān)的microRNA尚未清楚。因此本研究的旨在探討芪藶強心對在苯腎上腺素引起的心肌肥大中的作用及其是否與miR-199a-5p相關(guān)。
　　方法:1.建立心肌細胞肥大模型并確定芪藶強心的作用:(1)分離原代新生大鼠心臟提取心室

2、心肌細胞并培養(yǎng)，在心肌細胞中加入苯腎上腺素(50umol/L，48h)誘導心肌細胞肥大;芪藶強心(0.5μg/ml，48 h)預(yù)處理肥大的心肌細胞或空白對照的心肌細胞，檢測各項指標的改變。(2)采用熒光定量PCR檢測心鈉肽(ANP)、腦鈉肽(BNP)、重組豬肌球蛋白(MYH7)的表達變化，免疫熒光檢測心肌細胞表面積，以及檢測蛋白/DNA的比例，確定心肌肥大模型建立。2.miR199a-5p在不同病理肥厚模型中的表達:運用real-tim

3、e PCR技術(shù)檢測擴張性心肌病患者、芪藶強心治療前后的急性心梗大鼠心臟，苯腎上腺素誘導的肥厚性心肌細胞中miRNA199a-5p的表達3.miRNA199a-5p在芪藶強心抑制心肌肥厚中的作用:在肥大的心肌細胞中加入芪藶強心，在此基礎(chǔ)上，轉(zhuǎn)染miRNA199a-5p或miRNA陰性對照的模擬物，分析miRNA199a-5p在芪藶強心抑制心肌肥厚機制中的作用。4.數(shù)據(jù)分析:所有的數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示，主要的統(tǒng)計學方法為單因素方差分析和

4、t檢驗，運用GraphPad統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，p＜0.05有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)果:1.芪藶強心可以有效的逆轉(zhuǎn)苯腎上腺素引起的心肌細胞肥大。苯腎上腺素PE作用于心肌細胞后，細胞表面積增大，心肌肥厚標志物(ANP，BNP，MYH7)和蛋白/DNA比例升高;然而，芪藶強心治療組中，ANP、BNP、MYH7的表達，細胞表面積，以及蛋白/DNA的比例均較苯腎上腺素處理組降低。2.miRNA199a-5p在不同的病理肥大模型中的變化。正

5、常人的心臟相比，擴心病病人的miRNA199a-5p升高，并且miRNA199a-5p在在急性心梗大鼠中以及在苯腎上腺素誘導的心肌肥大模型中表達升高，而芪藶強心處理后可以抑制急性心梗小鼠以及苯腎上腺素引起的miRNA199a-5p的升高。3.過表達miRNA199a-5p可以抑制芪藶強心調(diào)控的抗心肌肥大作用:我們的研究結(jié)果顯示，與microRNA陰性對照組相比，miR-199a-5p的模擬物使得細胞表面積增大，心肌肥厚標志物(ANP，B