褪黑素及其受體拮抗劑對哮喘小鼠模型氣道炎癥和氣道重構(gòu)的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景： 支氣管哮喘(Bronchialasthma)是一種呼吸系統(tǒng)常見的慢性氣道炎癥性疾病，是多種炎癥細胞(如嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T細胞、中性粒細胞、氣道上皮細胞等)和細胞組分共同參與的氣道慢性炎癥性疾患。氣道慢性炎癥所引發(fā)的氣道反復損傷、修復，可導致氣道結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，稱為氣道重塑，其特點包括氣道壁增厚，上皮下纖維化，黏液化生，成纖維細胞增生，肌細胞增生和肥大，上皮增生和血管改變?nèi)缪芡ㄍ感栽黾雍托卵苌?。氣道重塑可能導?/p>

2、氣道高反應性和可逆性或不可逆性氣流阻塞。 目的： 1．觀察氣道炎癥和氣道重塑在小鼠慢性哮喘模型中的變化。 2．早期褪黑素干預對哮喘小鼠氣道炎癥和氣道重塑發(fā)生、發(fā)展的影響。 3．褪黑素受體拮抗劑對氣道炎癥和氣道重塑的干預作用 方法： SPF級雄性Balb／c小鼠95只，6-8周齡，體重25～28克。小鼠適應性飼養(yǎng)一周后，隨機分為對照組(NS／NS組)、哮喘組(OVA／OVA組)、MT治療組(

3、MT／OVA組)、激素治療組(DXM／OVA組)、MT受體拮抗劑組(LUZ／OVA組)。第0天、第7天‘I~／OVA、MT／OVA、DXM／OVA、LV2/OVA組腹腔注射OVA懸液0．4MT(OVA100μg，硫酸鋁鉀1．6mg溶于生理鹽水)，NS／NS組則予腹腔注射生理鹽水0．4MT。第14天，小鼠置于霧化吸入箱內(nèi)(50cm×27cm×25cm)，NS／NS組霧化吸入生理鹽水30分鐘，謫／OVA、MT／OVA、DXM／OVA組霧化吸

4、入1％OVA30分鐘，隔天一次，每周3次。各組在霧化吸入前半小時予腹腔注射BrdU，劑量50mg&g，每周3次。同時在每次霧化前半小時MT／OVA組予腹腔注射MT，劑量10mg／Kg,DXM／OVA組予腹腔注射DXM，劑量1．5mg／kg，LUZ／OVA組予腹腔注射LUZ，劑量30mg／Kg；NS／NS、NS／OVA組則腹腔注射生理鹽水。除LUZ／0VA組外，其它組注射藥物時間選擇在每天上午8點，而LUZ／OVA組只做2周急性期組，腹腔

5、注射LUZ時間選擇在凌晨零點。注射MT和LUZ時應避光，考慮到MT的晝夜節(jié)律性，早8點是MT的分泌低谷，在體內(nèi)MT濃度最低時給MT，而夜間零點是MT分泌最高峰，在MT濃度最高時給予LUZ。前四組在霧化的第2、4、8周，LUZ／OVA組在霧化的第2周，于末次霧化24小時后處死小鼠取材。肺組織石蠟切片作蘇木素伊紅染色(HE)、Masson三原色法染膠原纖維、過碘酸一無色品紅法(PAS)染氣道杯狀細胞，以及BrdU免疫組織化學染色，借助Met

6、aMorph圖像分析軟件測量單位氣道面積炎性細胞數(shù)目、支氣管基底膜周徑(Pbm)、上皮粘膜層面積(WAmuc)、平滑肌面積(WAm)、氣管內(nèi)壁面積(WAi)，膠原面積(Wc01)、杯狀細胞的比例、氣管基底膜(／lmm)上BrdU陽性細胞數(shù)目。 結(jié)論： 1、過敏原(OVA)致敏及反復霧化激發(fā)小鼠所引起的氣道病理改變可反映出哮喘患者的氣道炎癥和氣道重塑。 2、氣道炎癥和氣道重塑在哮喘發(fā)病早期即可出現(xiàn)，在一定時期內(nèi)，并