應用血小板蛋白質組學方法篩選ITP患兒血小板蛋白標志物.pdf

1、研究背景與目的：免疫性血小板減少癥(ITP)是一種免疫介導的血小板減少綜合征，是兒童最為常見的出血性疾病。迄今，ITP的發(fā)病機制尚未完全明了，ITP時血小板功能究竟如何、血小板是否處于激活狀態(tài)等，目前并無定論。目前對ITP的診斷依然是“排除診斷法”，臨床上診斷主要靠外周血小板減少但其無特異性；抗血小板自身抗體(PAIgG)的檢測對于ITP的診斷有限，盡管對其檢測的敏感性和特異性有所提高，但仍然無法將“原發(fā)免疫性血小板減少癥”與“繼發(fā)性免

2、疫性血小板減少癥”區(qū)分開來。因此，以血小板為基礎，研究血小板表達的特殊蛋白質，分析其功能變化在ITP發(fā)病中的作用，對闡明ITP的發(fā)病機制具有重要意義。表面增強激光解吸電離飛行時間質譜(surface enhanced laser desorption/ionization-time offlight-mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)技術是近年發(fā)展起來的一種蛋白組學研究方法。它可對血清、細胞裂解液等生物樣品直

3、接進行檢測，能基本反映被檢樣本中蛋白質的全貌，進而可以發(fā)現(xiàn)蛋白質的變化，為早期診斷、預后估計、復發(fā)或轉移的監(jiān)測提供了可能。本研究旨在利用Ciphergen公司的蛋白質芯片飛行時間質譜儀系統(tǒng)結合蛋白芯片對ITP，ITP治療組及正?；純貉“宀町惐磉_蛋白進行分析，篩選與ITP相關的血小板蛋白質標志物，在血小板蛋白質組水平探討ITP的發(fā)病機制。探討建立可用于ITP早期診斷的分類模型。
　　方法：采用SELDI(surface enhan

4、ced laser desorption/ionization，SELDI)蛋白芯片技術，檢測40例ITP患兒、40例ITP治療組患兒及35例正常兒童血小板進而獲得血小板蛋白質圖譜圖，將獲得的蛋白質譜圖用Ciphergen公司的Biomarker Wizard和Biomarker Pattern軟件分析，通過交叉驗證建立起ITP早期診斷的分類樹模型，并另將含有40例ITP患兒和35例正常兒童的驗證組共75例對此模型進行盲法驗證。蛋白質組

5、數(shù)據(jù)庫查詢差異蛋白，篩選與ITP相關的血小板蛋白質。
　　結果：1，在分子質量/電荷比值(質荷比，mass electron ratio，M/Z)為2000-20000范圍內，對40例ITP患兒及35例正常兒童血小板蛋白進行分析結果發(fā)現(xiàn)共有22個蛋白表達量存在統(tǒng)計學差異(P<0.01)，1個蛋白峰表達上調，21個蛋白峰表達下調，篩選出的22個差異蛋白質峰經(jīng)蛋白數(shù)據(jù)庫的初步鑒定，這些蛋白可能與血小板蛋白質的生成與翻譯，信號轉導，轉錄

6、的調控，免疫調控，免疫應答，抗凝及細胞之間的調節(jié)等有關。它們分別為磷酯酰絲氨酸脫羧酶α鏈，50S核糖體L34，內分泌蛋白質VGF，假定未知編碼蛋白MIR22HG，Humanin-Iike蛋白質5，β-防衛(wèi)素110，乳粘素，尿激酶Ⅰ型纖溶酶原激活物，P3(42)，人C13orf3(SKA3)，緊密連接關聯(lián)蛋白1，信號轉導蛋白CD24，核膜孔蛋白-62 C末端樣蛋白。另外亦有9個蛋白質峰在數(shù)據(jù)庫中鑒定結果為unnamed。2，在篩選出的22

7、個差異蛋白峰中，以質荷比為5170.65、7672.06 m/z、3553.70m/z、2281.72 m/z的蛋白質峰差異最明顯，以此建立的分類樹診斷模型，其準確率、靈敏度及特異度為96％(72/75)、100％(40/40)和92.5％(32/35)。將包括ITP患兒40例和35例正常兒童的驗證組對此模型進行盲法驗證，結果該模型診斷ITP的準確率、靈敏度及特異度分別是95％(71/75)、96％(38/40)和94％(33/35)。