慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者血小板差異蛋白質(zhì)的初探.pdf

1、特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）是臨床常見的出血性疾病，約占出血性疾病總數(shù)的30％，臨床表現(xiàn)為無明顯外源性病因的血小板數(shù)量減少從而引起廣泛皮膚粘膜和內(nèi)臟出血，顱內(nèi)出血是本病的致死病因。根據(jù)出血時間長短可分為急性型和慢性型，急性型通常發(fā)生在兒童，病程呈自限性，一般不超過6個月，慢性型多發(fā)生在青年女性，很少能自行緩解（自行緩解率≤5%），常持續(xù)數(shù)年。臨床上給予腎上腺皮質(zhì)

2、激素、靜脈注射丙種免疫球蛋白、利妥昔單抗等免疫抑制劑、促血小板生成素等促進(jìn)血小板生成藥物治療后，急性ITP患者多數(shù)都能治愈，慢性ITP患者的血小板計數(shù)雖然能上升，但在藥物減量或停藥后，病情又復(fù)發(fā)，往往表現(xiàn)為間歇性發(fā)作與緩解交替。雖然國內(nèi)外學(xué)者普遍認(rèn)為慢性ITP的發(fā)病機制主要與免疫反應(yīng)及血小板成熟障礙有關(guān)，但詳細(xì)的發(fā)生過程并不清楚，而且慢性ITP的治療效果欠佳，所以深入研究慢性ITP的發(fā)病機制極為重要，本論文采用相對和絕對定量的同位素（i

3、sobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ）標(biāo)記技術(shù)觀察正常人與慢性ITP患者血小板的差異蛋白質(zhì)變化，從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度揭示慢性ITP的發(fā)病機制，為臨床防治慢性ITP提供新的理論依據(jù)。
　　【目的】
　　比較慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）患者與健康對照者的血小板的蛋白質(zhì)表達(dá)的差異，在蛋白質(zhì)組學(xué)水平探討慢性ITP的發(fā)生機制。
　　【方法】

4、>　　從血液內(nèi)科臨床病例中收集10例慢性ITP患者的外周血，同時收集10例健康對照者的外周血。分別提取10例慢性ITP患者和10例健康對照者的富含血小板的血漿（PRP）,建立樣本池，提取慢性ITP患者和健康對照者的血小板總蛋白，用蛋白酶酶解蛋白，采用相對和絕對定量的同位素標(biāo)記肽段，經(jīng)強陽離子交換色譜分離肽段和反相色譜除鹽純化肽段后進(jìn)行質(zhì)譜檢測，得到質(zhì)譜圖并將其輸入到PD（Proteome Discoverer1.3，thermo）軟件，

5、軟件先對質(zhì)譜譜圖進(jìn)行篩選，PD提取后的譜圖用mascot進(jìn)行搜索，搜索結(jié)束后，PD軟件根據(jù)mascot搜索結(jié)果和第一步篩選后的譜圖進(jìn)行定量分析，得到可信的蛋白質(zhì)鑒定和定量結(jié)果。
　　【結(jié)果】
　　經(jīng)質(zhì)譜檢測及Mascot軟件檢索后獲得匹配蛋白共1679個，實驗組與對照組差異在1.2倍以上且p<0.05的蛋白共673個,其中上調(diào)353個,下調(diào)320個。差異在3.6倍以上且p﹤0.05的蛋白共有35個，上調(diào)34個，僅有一個下調(diào)蛋

6、白，為內(nèi)皮細(xì)胞清道夫受體4（SREC-4）；而差異在4.8倍以上且p﹤0.05的差異蛋白共有12個，全部為上調(diào)蛋白。
　　【結(jié)論】
　　1.上調(diào)蛋白中的維生素D結(jié)合蛋白、脂多糖結(jié)合蛋白、免疫球蛋白家族、載脂蛋白A-Ⅱ、載脂蛋白A-Ⅳ和下調(diào)蛋白內(nèi)皮細(xì)胞清道夫受體4參與慢性ITP的發(fā)生。
　　2.對于這些蛋白如何影響慢性ITP發(fā)生過程中各個信號通路的詳細(xì)機制目前尚不清楚，深入研究這些蛋白的分子機制將有助于進(jìn)一步闡明慢性IT