慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者血小板差異蛋白質的初探.pdf

1、特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）是臨床常見的出血性疾病，約占出血性疾病總數(shù)的30％，臨床表現(xiàn)為無明顯外源性病因的血小板數(shù)量減少從而引起廣泛皮膚粘膜和內臟出血，顱內出血是本病的致死病因。根據(jù)出血時間長短可分為急性型和慢性型，急性型通常發(fā)生在兒童，病程呈自限性，一般不超過6個月，慢性型多發(fā)生在青年女性，很少能自行緩解（自行緩解率≤5%），常持續(xù)數(shù)年。臨床上給予腎上腺皮質

2、激素、靜脈注射丙種免疫球蛋白、利妥昔單抗等免疫抑制劑、促血小板生成素等促進血小板生成藥物治療后，急性ITP患者多數(shù)都能治愈，慢性ITP患者的血小板計數(shù)雖然能上升，但在藥物減量或停藥后，病情又復發(fā)，往往表現(xiàn)為間歇性發(fā)作與緩解交替。雖然國內外學者普遍認為慢性ITP的發(fā)病機制主要與免疫反應及血小板成熟障礙有關，但詳細的發(fā)生過程并不清楚，而且慢性ITP的治療效果欠佳，所以深入研究慢性ITP的發(fā)病機制極為重要，本論文采用相對和絕對定量的同位素（i

3、sobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ）標記技術觀察正常人與慢性ITP患者血小板的差異蛋白質變化，從蛋白質組學的角度揭示慢性ITP的發(fā)病機制，為臨床防治慢性ITP提供新的理論依據(jù)。
　　【目的】
　　比較慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）患者與健康對照者的血小板的蛋白質表達的差異，在蛋白質組學水平探討慢性ITP的發(fā)生機制。
　　【方法】

4、>　　從血液內科臨床病例中收集10例慢性ITP患者的外周血，同時收集10例健康對照者的外周血。分別提取10例慢性ITP患者和10例健康對照者的富含血小板的血漿（PRP）,建立樣本池，提取慢性ITP患者和健康對照者的血小板總蛋白，用蛋白酶酶解蛋白，采用相對和絕對定量的同位素標記肽段，經(jīng)強陽離子交換色譜分離肽段和反相色譜除鹽純化肽段后進行質譜檢測，得到質譜圖并將其輸入到PD（Proteome Discoverer1.3，thermo）軟件，

5、軟件先對質譜譜圖進行篩選，PD提取后的譜圖用mascot進行搜索，搜索結束后，PD軟件根據(jù)mascot搜索結果和第一步篩選后的譜圖進行定量分析，得到可信的蛋白質鑒定和定量結果。
　　【結果】
　　經(jīng)質譜檢測及Mascot軟件檢索后獲得匹配蛋白共1679個，實驗組與對照組差異在1.2倍以上且p<0.05的蛋白共673個,其中上調353個,下調320個。差異在3.6倍以上且p﹤0.05的蛋白共有35個，上調34個，僅有一個下調蛋

6、白，為內皮細胞清道夫受體4（SREC-4）；而差異在4.8倍以上且p﹤0.05的差異蛋白共有12個，全部為上調蛋白。
　　【結論】
　　1.上調蛋白中的維生素D結合蛋白、脂多糖結合蛋白、免疫球蛋白家族、載脂蛋白A-Ⅱ、載脂蛋白A-Ⅳ和下調蛋白內皮細胞清道夫受體4參與慢性ITP的發(fā)生。
　　2.對于這些蛋白如何影響慢性ITP發(fā)生過程中各個信號通路的詳細機制目前尚不清楚，深入研究這些蛋白的分子機制將有助于進一步闡明慢性IT