應(yīng)用組織芯片技術(shù)對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶7（MMP-7），基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）與人結(jié)直腸癌腹腔轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：研究基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)，基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)在人結(jié)直腸癌(colorectal carcinoma,CRC)中的表達(dá)情況，以探討其在人結(jié)直腸癌腹腔轉(zhuǎn)移中的相關(guān)作用，為其在人結(jié)直腸癌腹腔轉(zhuǎn)移相關(guān)預(yù)測(cè)及監(jiān)測(cè)診斷性研究以及抗人結(jié)直腸癌藥物的治療性研究提供理論基礎(chǔ)，并初步探討組織芯片免疫組織化學(xué)在人結(jié)直腸癌相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)中的應(yīng)用。人結(jié)直腸癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，盡管對(duì)其采取了以手術(shù)為主的綜合性治療，但因缺乏有效的早期

2、診斷標(biāo)準(zhǔn)及抗轉(zhuǎn)移治療靶點(diǎn)，患者預(yù)后仍不佳。因此，深入研究控制人結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程的關(guān)鍵基因的表達(dá)變化及其作用，將為其早期診斷預(yù)后判斷和抗轉(zhuǎn)移治療提供理論依據(jù)。 基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)和金屬蛋白酶9(MMP-9)對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)成分具有廣泛的降解作用，與多數(shù)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。但有關(guān)其協(xié)同表達(dá)及其意義的研究國(guó)外報(bào)道較少，國(guó)內(nèi)還未見(jiàn)報(bào)道。 組織芯片(tissue chip)又稱組織微陣列(tissue microa

3、rrays，TMA)，是將數(shù)十至上千個(gè)小組織整齊地排放在一張載玻片上而制成的組織切片。1998年，Kononen等首次提出了組織芯片的概念，并制作了乳腺癌的組織微陣列，應(yīng)用熒光原位雜交、免疫組織化學(xué)和mRNA原位雜交技術(shù)研究了6種基因及其表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)狀態(tài)，不但發(fā)現(xiàn)這些指標(biāo)與乳腺癌的預(yù)后密切相關(guān)，而且與大組織的檢測(cè)結(jié)果完全一致。組織芯片的誕生為醫(yī)學(xué)病理學(xué)提供了一種高通量、大樣本以及快速的分子水平的分析工具。此以后，組織芯片技術(shù)得到了迅速

4、發(fā)展。國(guó)內(nèi)外發(fā)表的組織芯片技術(shù)相關(guān)報(bào)道已有近千篇。這樣用同一套組織芯片即可迅速的對(duì)上百種生物分子標(biāo)記(如抗原,DNA和RNA)進(jìn)行分析、檢測(cè)。因此組織芯片技術(shù)是建立疾病，特別是腫瘤的生物分子文庫(kù)的強(qiáng)有力的工具。為此，本實(shí)驗(yàn)擬應(yīng)用組織芯片技術(shù)，采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)12例正常大腸黏膜，50例伴有腹腔轉(zhuǎn)移腺癌組織，48例無(wú)腹腔轉(zhuǎn)移腺癌組織的MMP-7，MMP-9的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，旨在探討MMP-7，MMP-9對(duì)大腸癌發(fā)生和腹腔轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)

5、制。 方法：本實(shí)驗(yàn)分為三部分。 1.收集河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四病院外二科2006-2007年住院病人98例CRC原發(fā)灶和12例正常大腸黏膜的石蠟標(biāo)本，使用組織陣列儀(personaltis suear rayer)制作成組織芯片(也稱組織微陣列，tissue microarray)共3塊。 2.采用抗生物素蛋白一過(guò)氧化酶(SP)法，對(duì)組織芯片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，并評(píng)估MMP-7，MMP-9的表達(dá)情況。尋找與CRC

6、腹腔轉(zhuǎn)移密切相關(guān)腫瘤標(biāo)記物。 3.用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異非常顯著。比較有腹腔轉(zhuǎn)移腺癌與無(wú)腹腔轉(zhuǎn)移腺癌之間MMP-7，MMP-9的表達(dá)差異。 結(jié)果： 1.制備了組織芯片蠟塊3塊，每個(gè)蠟塊可切片成70-100張組織芯片玻片，供免疫組織化學(xué)檢測(cè)及今后研究使用。在制片、染色過(guò)程中組織芯片上有部分組織塊出現(xiàn)移位或脫失，可供統(tǒng)計(jì)分析的有96例。 2.MM