云南榅桲的抗鹽突變體篩選與多倍體誘導(dǎo).pdf

1、本研究以云南榅桲(Cydonia oblonga Mill)為試驗(yàn)材料，通過對影響云南榅桲薄層再生的若干因素的研究，建立了云南榅桲薄層再生體系;進(jìn)行了PYM和EMS誘變處理云南榅桲定向篩選抗鹽突變體的研究，篩選到了抗鹽性明顯提高的云南榅桲株系;同時(shí)利用秋水仙素進(jìn)行離體誘導(dǎo)云南榅桲的多倍體試驗(yàn)，通過流式細(xì)胞儀鑒定表明，獲得了云南榅桲的多倍體植株。主要研究結(jié)果如下:
　　1.云南榅桲薄層再生體系的建立
　　以云南榅桲莖段薄層為外

2、植體，系統(tǒng)地研究了植物生長調(diào)節(jié)劑、基本培養(yǎng)基、碳源和暗培養(yǎng)時(shí)間等對莖段薄層再生不定芽的影響。結(jié)果表明，云南榅桲薄層再生不定芽的適宜組合為MS+TDZ1.5mg·L-1+IBA0.4mg·L-1+蔗糖30mg·L-1+瓊脂7g·L-1，暗培養(yǎng)7d，再生頻率最高為35.41％，平均再生芽數(shù)2.15。薄層再生苗在生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA0.3mg·L-1+蔗糖20g·L-1+瓊脂7g·L-1上已經(jīng)生根。
　　2.定向誘導(dǎo)篩選云南榅桲

3、的抗鹽突變體
　　分別以PYM和EMS為誘變劑處理云南榅桲薄層后在薄層再生培養(yǎng)基上誘導(dǎo)再生不定芽，并將再生植株在含NaCl的繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行抗鹽突變體的定向篩選。結(jié)果表明，隨著誘變劑濃度的增加，薄層再生的再生率、平均再生芽數(shù)均下降，誘變處理所得的植株與對照植株相比，其抗鹽性明顯提高。同時(shí)對鹽脅迫下抗鹽突變體進(jìn)行了相關(guān)生理生化指標(biāo)的測定，結(jié)果表明，大多數(shù)誘變處理再生植株的SOD、POD酶活性顯著高于對照植株;MDA含量和Pro含量顯

4、著低于對照植株。
　　3.云南榅桲多倍體誘導(dǎo)
　　分別以云南榅桲莖段、莖段薄層為材料，研究了不同濃度秋水仙素對云南榅桲多倍體植株誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，云南榅桲莖段和薄層都可以作為多倍體誘導(dǎo)的材料，但以莖段為材料誘導(dǎo)多倍體受到秋水仙素后續(xù)毒害較為嚴(yán)重，而以薄層再生誘導(dǎo)的多倍體受到后續(xù)毒害較輕，并且沒有發(fā)現(xiàn)嵌合體。采用流式細(xì)胞儀對多倍體植株的倍性進(jìn)行鑒定，確定獲得了云南榅桲四倍體植株。同時(shí)對鹽脅迫下的多倍體植株進(jìn)行了生理生化指標(biāo)