體細胞化學誘導金銀花四倍體及抗鹽突變體研究.pdf

1、金銀花(Lonicera,japonica Thunb.)為忍冬科忍冬屬植物,又名二寶花、銀花、忍冬,是多年生半常綠藤本植株。金銀花自古被譽為清熱解毒的良藥。目前,利用金銀花提取其有效成分綠原酸(chlorogenic acid)、異綠原酸(iso-chlorogenic acid)等,在治療溫病、風熱感冒、咽喉腫痛、痢疾等癥狀有明顯的效果,在抗癌、抗病毒等方面也有較大的作用。
　　 本試驗通過對“紅星2號”金銀花離體再生體系的

2、研究,為實現“紅星2號”金銀花的人工快繁與規(guī)?；M培生產奠定基礎;通過組織培養(yǎng)和多倍體育種相結合的方法使“紅星2號”金銀花體細胞加倍,旨在獲得多倍體植株,為培育藥用價值更高的金銀花新品種提供理論依據。利用化學誘變技術與離體培養(yǎng)相結合的方法定向篩選金銀花耐鹽突變體,為金銀花栽培和進一步推廣提供一定的科學依據。
　　 本試驗以金銀花葉片為試材,對金銀花葉片離體再生體系及體細胞化學誘導金銀花四倍體和抗鹽突變體進行了初步探討。主要研究結

3、果如下:
　　 1、金銀花葉片離體再生體系的建立
　　 以金銀花葉片為外植體,研究了2,4-D等植物生長調節(jié)劑對愈傷組織誘導及植株再生的影響。結果表明:最佳愈傷組織誘導培養(yǎng)基為MB+1.0 mg/L2,4-D+0.5mg/L KT,愈傷誘導率達91.8%,生長良好;最佳不定芽分化培養(yǎng)基為MB+2.0mg/L6-BA+0.1mg/L,IBA,不定芽分化率達93.3%,且生長旺盛;最佳不定芽生根培養(yǎng)基為1/2 MB+2.0m

4、g/L IBA+0.2mg/L IAA,生根率達83.3%,且根較多,苗健壯。試管苗移栽成功率達89.3%。
　　 2、金銀花體細胞多倍體誘導及其鑒定
　　 在金銀花葉片再生體系的基礎上,進行愈傷組織培養(yǎng);采用秋水仙素浸泡法和混合培養(yǎng)法處理金銀花愈傷組織進行多倍體誘導,并比較不同方法和不同處理時間的變異率,以期獲得最有效的金銀花多倍體誘導方法。結果表明,不同處理方式對金銀花多倍體誘導率有顯著影響。浸泡法以0.1%秋水仙素

5、浸泡15h,四倍體誘導率達到最高,為30.5%?；旌吓囵B(yǎng)法以0.1%秋水仙素培養(yǎng)15d,四倍體誘導率達到最高,為21.2%。莖尖染色體壓片檢測表明,二倍體染色體數2n=2x=18,四倍體2n=4x=36,并獲得了同源四倍體金銀花植株(2n=4x=36)。四倍體金銀花植株與二倍體相比,葉片下表皮氣孔保衛(wèi)細胞減少,葉綠體數增多,葉型指數減小,生長緩慢。同時也發(fā)現嵌合體現象。
　　 3、金銀花離體抗鹽突變體的篩選及生理特性研究

6、　　 用甲基磺酸乙酯(EMS)對金銀花離體葉片進行處理,結果表明,隨著處理濃度和處理時間增加,葉片的分化率和存活率均下降,并篩選出半致死濃度(0.6%)和處理時間(6h)。利用篩選的EMS濃度和處理時間對離體葉片處理,在0.8%NaCl鹽濃度脅迫下進行抗鹽突變體篩選,得到抗鹽性誘變再生植株。經鑒定,其超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)活性增加,丙二醛(MDA)含量降低且脯氨酸(Pro)增加,表明篩選的金銀花突變再生植株較對