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文檔簡介
1、目的:天花粉蛋白(TCS)是一種單鏈核糖體失活蛋白,它能抑制真核生物蛋白質合成,并具有廣譜的抗病毒活性。近期研究發(fā)現(xiàn)TCS可專一性地殺死被HIV感染的細胞,而對正常細胞無作用。本實驗利用PCR技術從栝樓基因組DNA中擴增出TCS基因,成功構建了克隆載體和表達載體,并建立了TCS隨機突變文庫,這為TCS的原核表達奠定了分子生物學的基礎。 方法: 1).從新鮮栝樓葉片中獲取TCS基因組DNA,利用PCR技術擴增其全長基因,與
2、載體pUCm-T連接,轉化感受態(tài)E.coli DH5a,提取質粒進行測序; 2).用PCR法克隆TCS成熟肽基因(CDS),經(jīng)NcoⅠ和HindⅢ雙酶切后連接經(jīng)同樣雙酶切的pET-28a(+)載體,轉化Ecoli DH5a,陽性鑒定后將所獲陽性重組質粒轉化感受態(tài)Ecoli BL21(DE3)得到工程菌,經(jīng)IPTG誘導表達后,對表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE分析; 3).采用易錯PCR技術構建TCS基因和活性中心隨機突變文庫
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