豬源抗菌肽Protegrin-1突變體基因在大腸桿菌中的融合表達(dá).pdf

1、在擴(kuò)增Protegrin-1基因和結(jié)構(gòu)分析的基礎(chǔ)上,根據(jù)抗菌肽結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系對豬源抗菌肽基因Protegrin-1成功地進(jìn)行了改造,構(gòu)建出抗菌肽重組表達(dá)質(zhì)粒PG1(K)-4T,實(shí)現(xiàn)了抗力肽突變體基因PG1(K)在原核細(xì)胞中高效可溶性表達(dá).表達(dá)的融合蛋白經(jīng)親和層析純化和FXa因子酶切后,其初產(chǎn)物具有抗菌活性.1.用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出豬源抗菌肽前體基因Protegrin-1,并克隆至pGEM-T easy載體.2.根據(jù)抗菌肽的特性,對

2、Protegrin-1基因進(jìn)行了改造.在Protegrin-1基因前面添加FXa因子酶切位點(diǎn);第一個(gè)精氨酸替換為賴氨酸;基因末端添加了具有酰胺化的β位的天冬氨酸,在期表達(dá)出末端酰胺化的具有抗菌活性的抗菌肽;同時(shí)對部分氨基酸密碼子進(jìn)行優(yōu)化.3.對基因工程重組菌進(jìn)行大量誘導(dǎo)表達(dá),超聲后取上清親和層析純化,產(chǎn)物純度可達(dá)80％以上.將純化的融合蛋白經(jīng)FXa因子酶切緩沖進(jìn)行透析后,進(jìn)行切割.抗菌活性試驗(yàn)表明酶切后的初產(chǎn)物對臨床分離的多重耐藥大腸桿