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文檔簡介
1、在擴增Protegrin-1基因和結構分析的基礎上,根據(jù)抗菌肽結構與功能的關系對豬源抗菌肽基因Protegrin-1成功地進行了改造,構建出抗菌肽重組表達質(zhì)粒PG1(K)-4T,實現(xiàn)了抗力肽突變體基因PG1(K)在原核細胞中高效可溶性表達.表達的融合蛋白經(jīng)親和層析純化和FXa因子酶切后,其初產(chǎn)物具有抗菌活性.1.用RT-PCR技術擴增出豬源抗菌肽前體基因Protegrin-1,并克隆至pGEM-T easy載體.2.根據(jù)抗菌肽的特性,對
2、Protegrin-1基因進行了改造.在Protegrin-1基因前面添加FXa因子酶切位點;第一個精氨酸替換為賴氨酸;基因末端添加了具有酰胺化的β位的天冬氨酸,在期表達出末端酰胺化的具有抗菌活性的抗菌肽;同時對部分氨基酸密碼子進行優(yōu)化.3.對基因工程重組菌進行大量誘導表達,超聲后取上清親和層析純化,產(chǎn)物純度可達80％以上.將純化的融合蛋白經(jīng)FXa因子酶切緩沖進行透析后,進行切割.抗菌活性試驗表明酶切后的初產(chǎn)物對臨床分離的多重耐藥大腸桿
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