天花粉蛋白抑制胃癌細胞生長及其分子機制研究.pdf

1、目的:
　　目前我國胃癌的發(fā)病率以及死亡率均居高不下。中藥瓜蔞的塊根含天花粉蛋白(trichosanthin，TCS)，具有潛在的抗腫瘤作用。本文通過研究天花粉蛋白對人胃癌細胞誘導凋亡的作用，以期發(fā)現(xiàn)通過誘導細胞凋亡來抑制胃癌的新型中成藥。同時，我們將在細胞內研究天花粉蛋白賴氨酸(K)173/精氨酸(R)174和賴氨酸(K)177的突變體對核糖體蛋白合成功能的抑制作用，進一步探討天花粉蛋白抗腫瘤的分子機制。
　　研究方法:<

2、br>　　取處于對數(shù)生長期的胃癌SGC7901細胞，用不同濃度的天花粉蛋白處理后，分別從細胞形態(tài)學及細胞生長增殖兩方面來檢測天花粉蛋白對胃癌SGC7901細胞的影響。應用流式細胞儀測定天花粉蛋白對胃癌SGC7901細胞周期及凋亡的作用。應用Westernblotting觀察胃癌SGC7901細胞caspase-9、caspase-3; PARP; pERK; ERK的變化。同時，通過定點突變、質粒轉化、擴增、提取、測序、轉染等方法構建天

3、花粉蛋白K173A/R174A和K177A的突變體，最后通過測定熒光素酶活性，對比野生型天花粉蛋白及突變K173A/R174A和K177A后的天花粉蛋白對核糖體蛋白合成的抑制作用。
　　研究結果:
　　(1)天花粉蛋白處理后的胃癌SGC7901細胞出現(xiàn)了皺縮、變形，對胃癌SGC7901細胞的生長有明顯的抑制作用。(2)天花粉蛋白可以將胃癌SGC7901細胞阻滯于S期。(3)天花粉蛋白誘導胃癌SGC7901細胞發(fā)生凋亡，并且細

4、胞凋亡呈現(xiàn)出濃度依賴性。(4) Western blotting法檢測結果顯示:caspase-9，caspase-3，PARP表達降低，呈濃度依賴性。并且隨著天花粉蛋白濃度的升高，ERK表達降低，天花粉蛋白處理(7.0和14μM)激活ERK，磷酸化ERK升高。(5)在細胞內，野生種天花粉蛋白能抑制熒光素酶活性，突變種K173A/R174A對熒光素酶活性抑制作用強于野生種天花粉蛋白，突變種K177A對熒光素酶活性抑制作用最強。