絡(luò)合銅宮內(nèi)節(jié)育器對大鼠的避孕效果及其相關(guān)因子表達的研究.pdf

1、第一部分絡(luò)合銅宮內(nèi)節(jié)育器對大鼠的抗生育作用及生育力恢復實驗
　　目的:研究絡(luò)合銅生物高分子復合材料宮內(nèi)節(jié)育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD,簡稱絡(luò)合銅IUD)對大鼠的避孕效果,以及取器后對生育力的可逆性恢復能力。
　　方法:160只性成熟SPF級雌性SD大鼠,隨機分為6組:假手術(shù)組(SO group,n=20)、金屬裸銅組(Cu group,n=30)、生物基體材料組(SiO2/PVA group,n=30)、絡(luò)合銅

2、低劑量組(CuCl2/SiO2/PVA group I,Cu2+釋放率為5-10ug/220mm2/d,n=30)、絡(luò)合銅高劑量組(CuCl2/SiO2/PVA group II,Cu2+釋放率為10-20ug/220mm2/d,n=30)和空白對照組(NC group,n=20)。適應性喂養(yǎng)一周后置器,置器30d后,每組取20只(假手術(shù)組與空白對照組每組取10只)雌性大鼠與有生育力的雄鼠交配,于孕14d處死雌鼠,觀察受孕和胚胎發(fā)育情況

3、。另每組剩余的10只大鼠取器,觀察生育力恢復情況。
　　結(jié)果:置絡(luò)合銅宮內(nèi)節(jié)育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD)大鼠的抗生育率均為100％,且低劑量組(CuCl2/SiO2/PVA group I)的生育力恢復率為100％,與金屬裸銅組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:低劑量絡(luò)合銅生物高分子復合材料宮內(nèi)節(jié)育器(CuCl2/SiO2/PVA I IUD)具有與傳統(tǒng)金屬裸銅IUD同樣良好的避孕效果和生育力

4、的可逆性恢復能力。
　　第二部分絡(luò)合銅宮內(nèi)節(jié)育器對大鼠血清和宮腔液銅離子的釋放行為研究
　　目的:通過檢測不同材料宮內(nèi)節(jié)育器在置器的不同時間點大鼠血清和宮腔液銅離子的濃度,以初步評估絡(luò)合銅生物高分子復合材料宮內(nèi)節(jié)育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD)的安全性。
　　方法:60只性成熟SPF級雌性SD大鼠,10-12周齡,隨機分為6組:假手術(shù)組(SO group,n=10)、金屬裸銅組(Cu group,n=10)

5、、生物基體材料組(SiO2/PVA group,n=10)、絡(luò)合銅低劑量組(CuCl2/SiO2/PVA group I,n=10)、絡(luò)合銅高劑量組(CuCl2/SiO2/PVA group II,n=10)組和空白對照組(NC group,n=10)。于置器后60d內(nèi)的不同時間點(0d、1d、3d、5d、7d、30d、60d)分別取大鼠血清和局部宮腔液,通過原子吸收火焰法測定大鼠血清和局部宮腔液的Cu2+濃度。
　　結(jié)果:不同時

6、間點各組大鼠的血清Cu2+濃度差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在置器的第1周里,各組置器大鼠(除生物基體材料組以外)的宮腔液Cu2+濃度明顯升高,且金屬裸銅組升高的速率顯著高于絡(luò)合銅組;絡(luò)合銅組大鼠宮腔液Cu2+濃度在第5d即達到峰值,而裸銅組在第5d后仍有上升趨勢;置器后的30d到60d,絡(luò)合銅低劑量組的宮腔液Cu2+濃度顯著低于裸銅組和絡(luò)合銅高劑量組;置絡(luò)合銅IUD的大鼠宮腔液Cu2+濃度與裸銅組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.

7、05)。
　　結(jié)論:絡(luò)合銅生物高分子復合材料宮內(nèi)節(jié)育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD)避免了傳統(tǒng)金屬裸銅IUD在置入初期的Cu2+暴釋現(xiàn)象,且在不同時間點全身血清濃度均維持在較低且穩(wěn)定的范圍,提示其在發(fā)揮Cu2+局部避孕作用的基礎(chǔ)上不會出現(xiàn)體內(nèi)Cu2+蓄積。
　　第三部分絡(luò)合銅宮內(nèi)節(jié)育器對大鼠子宮內(nèi)膜的形態(tài)學影響
　　目的:研究絡(luò)合銅生物高分子復合材料宮內(nèi)節(jié)育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD)對大鼠子宮

8、內(nèi)膜及重要臟器的形態(tài)學影響,以初步探討絡(luò)合銅宮內(nèi)節(jié)育器的安全性。
　　方法:60只性成熟SPF級雌性SD大鼠,10-12周齡,隨機分為5組:金屬裸銅組(Cu group)、生物基體材料組(SiO2/PVA group)、絡(luò)合銅低劑量組(CuCl2/SiO2/PVA group I)、絡(luò)合銅高劑量組(CuCl2/SiO2/PVA group II)和空白對照組(NC group)。在大鼠左側(cè)子宮近陰道段作一切口,朝卵巢方向置入不同材

9、料,分別于置器30d和60d后取置器側(cè)子宮內(nèi)膜、卵巢及心、肝、脾、肺、腎、腦組織,采用HE染色和透射電鏡技術(shù)觀察其組織病理和超微病理的形態(tài)學改變。
　　結(jié)果:置器的大鼠子宮內(nèi)膜均可見上皮細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。子宮內(nèi)膜組織病理檢查所示絡(luò)合銅低劑量組30d和60d炎癥反應比裸銅組輕,且未見全身其他重要臟器病理學異常改變。超微病理檢查顯示裸銅組30d后的子宮內(nèi)膜出現(xiàn)微絨毛稀少或消失,線粒體腫脹,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,腺上皮細胞內(nèi)初級溶酶體增多

10、及大量空泡形成等改變,且在置器60d后改變更為明顯;而絡(luò)合銅低劑量組大鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞的改變較輕微,且兩個時間點差異不明顯。
　　結(jié)論:與裸銅宮內(nèi)節(jié)育器相比,置低劑量絡(luò)合銅生物高分子復合材料宮內(nèi)節(jié)育器(CuCl2/SiO2/PVA I IUD)大鼠子宮內(nèi)膜組織病理和超微病理的形態(tài)學改變較小,證明其對子宮內(nèi)膜的刺激作用較輕微,因而可能減少置器初期的不良反應。
　　第四部分絡(luò)合銅宮內(nèi)節(jié)育器對大鼠子宮內(nèi)膜相關(guān)因子表達的研究

11、>　　目的:通過檢測各組大鼠子宮內(nèi)膜中與出血、疼痛等副作用相關(guān)的因子,以初步探討新材料絡(luò)合銅生物高分子復合材料宮內(nèi)節(jié)育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD)對大鼠子宮內(nèi)膜內(nèi)環(huán)境的影響和減少置器后副反應的可能機制。
　　方法:40只性成熟SPF級雌性SD大鼠,10-12周齡,隨機分為4組:金屬裸銅組(Cu group)、低劑量絡(luò)合銅組(CuCl2/SiO2/PVA group I)、高劑量絡(luò)合銅組(CuCl2/SiO2/PVA

12、group II)和空白對照組(NC group)。置器60d后,對子宮內(nèi)膜出血、疼痛等副作用的相關(guān)因子進行檢測:分別采用免疫組化S-P法、蛋白印跡法(Western blotting)和實時熒光定量PCR技術(shù)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測各組大鼠子宮內(nèi)膜組織中P物質(zhì)(SP)及其受體(SPR)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及其受體(Flk1)、基質(zhì)

13、金屬蛋白酶9(MMP9)及其抑制因子(TIMP-1)的相關(guān)蛋白和mRNA的表達水平。
　　結(jié)果:①SP和SPR主要表達于子宮內(nèi)膜血管壁的周圍及部分內(nèi)膜間質(zhì)細胞胞漿,MMP9和TIMP-1廣泛表達于子宮內(nèi)膜腺上皮、基質(zhì)及血管內(nèi)皮,VEGF及Flk1在大鼠子宮內(nèi)膜腺上皮及基質(zhì)內(nèi)均有表達;②與金屬裸銅組相比,絡(luò)合銅組尤其是低劑量組的相關(guān)因子(SP、SPR、MMP9、VEGF和Flk1)的蛋白和mRNA表達水平較低,TIMP-1則較高,差