壓瘡組織中iNOS和eNOS及細(xì)胞凋亡對(duì)其難愈性機(jī)制影響的研究.pdf

1、目的：探討壓瘡組織細(xì)胞中iNOS和eNOS的表達(dá)和細(xì)胞凋亡情況及其與壓瘡難愈性的關(guān)系，分析壓瘡難愈性的可能機(jī)制。 材料和方法： ①標(biāo)本的采集及分組：在患者知情同意的情況下取9例患有Ⅲ度壓瘡病人的壓瘡皮膚組織，按壓瘡潰瘍中心基底部組織、潰瘍邊緣組織、正常皮膚組織進(jìn)行分組對(duì)照：正常皮膚組織為Ⅰ組，潰瘍邊緣組織為Ⅱ組，潰瘍中心基底部組織為Ⅲ組。 ②實(shí)驗(yàn)方法與目的：對(duì)切片進(jìn)行HE染色，觀察壓瘡組織所發(fā)生的病理學(xué)變化；對(duì)切

2、片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色（SP法），觀察壓瘡組織內(nèi)iNOS、eNOS的表達(dá)情況；DNA原位缺口末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測(cè)壓瘡組織中凋亡細(xì)胞情況。 ③結(jié)果判定：iNOS、eNOS抗原陽性表達(dá)位于細(xì)胞漿，細(xì)胞漿呈黃色或棕黃色；凋亡細(xì)胞陽性表達(dá)位于細(xì)胞核，細(xì)胞核呈黃色或棕黃色。每張切片中隨機(jī)選擇5個(gè)視野（x400倍率）觀察陽性細(xì)胞分布和著色情況，用Image-prol-plus6．0計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)檢測(cè)陽性細(xì)胞表達(dá)的強(qiáng)弱。

3、④統(tǒng)計(jì)分析：采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件：采用單因素方差分析對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；變量間關(guān)系用直線相關(guān)分析；數(shù)據(jù)以（x±s）表示；以P<0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：iNOS、eNOS在正常皮膚組織、潰瘍邊緣組織、潰瘍基底部組織中的表達(dá)： ①正常皮膚組織：iNOS主要在表皮、皮脂腺、毛囊等處表達(dá)，正常血管內(nèi)皮細(xì)胞很少表達(dá)。eNOS在表皮中表達(dá)較弱，皮下僅少數(shù)毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞有表達(dá)； ②潰瘍邊緣皮膚組織：i

4、NOS在表皮表達(dá)較正常皮膚表皮弱，皮脂腺、毛囊處表達(dá)增強(qiáng)，出現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)，真皮層基質(zhì)內(nèi)大量炎癥細(xì)胞（單核巨噬細(xì)胞為主）表達(dá)呈陽性；eNOS在表皮全層細(xì)胞均有表達(dá)，真皮組織中的各種血管內(nèi)皮細(xì)胞均呈陽性表達(dá)，其它細(xì)胞少見陽性； ③潰瘍中心的基底部：iNOS在肉芽組織中表達(dá)呈強(qiáng)陽性，主要表達(dá)在各種新生血管內(nèi)皮細(xì)胞以及炎癥細(xì)胞中。eNOS在成纖維細(xì)胞以及肉芽組織中的各種血管內(nèi)皮細(xì)胞呈強(qiáng)陽性表達(dá)。iNOS、eNOS在潰瘍組織中的表

5、達(dá)有如下規(guī)律：潰瘍邊緣組織表達(dá)強(qiáng)于正常皮膚組織，潰瘍中心基底部組織強(qiáng)于潰瘍邊緣組織，陽性細(xì)胞的積分光密度值各組間兩兩比較差異有顯著性（P值均<0．01）。 凋亡細(xì)胞在正常皮膚組織、潰瘍邊緣組織及潰瘍中心組織中的分布情況：壓瘡潰瘍中心組織以及邊緣組織出現(xiàn)了大量的表皮基底層細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、及成纖維細(xì)胞的大量凋亡，且潰瘍中心組織中凋亡細(xì)胞數(shù)目多于潰瘍邊緣組織，正常皮膚組織細(xì)胞凋亡較少（P值均<0．01）。 各組皮下組織中細(xì)

6、胞凋亡情況與iNOS和eNOS的表達(dá)有明顯相關(guān)關(guān)系（r=0．601，r=0．610）。 結(jié)論： ①潰瘍中心和邊緣組織中，炎癥細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞均能見到iNOS的高表達(dá)，由血管內(nèi)皮細(xì)胞等非炎癥細(xì)胞中過表達(dá)的iNOS催化產(chǎn)生的大量NO可以導(dǎo)致膠原產(chǎn)生和細(xì)胞增殖減少，阻止創(chuàng)面修復(fù)。 ②壓瘡潰瘍中心及邊緣組織中高表達(dá)的eNOS導(dǎo)致血管過度擴(kuò)張致使微血管內(nèi)皮損傷、滲出液增多加重了局部組織水腫，延緩壓瘡創(chuàng)面的愈合。