溫和灸對大鼠難愈性創(chuàng)面組織修復干預作用的研究.pdf

1、目的：
　　通過觀察溫和灸與特定電磁波譜治療儀(TDP)對大鼠難愈性創(chuàng)面組織修復的療效，觀測其愈合時間、創(chuàng)面愈合率、白介素-6(IL-6)、類胰島素生長因子(IGF-1)、表面巨噬細胞計數(shù)、微血管密度(MVD)及其Ⅰ、Ⅲ型膠原含量等指標的變化，以探討溫和灸對難愈性創(chuàng)面組織修復的作用機理，以期為灸法臨床治療難愈性創(chuàng)面提供可靠的實驗依據(jù)。
　　方法：
　　采用付氏法復制大鼠難愈性創(chuàng)面模型。選取出生6周，體重200～220g

2、的健康SD雄性大鼠112只。將其隨機分成兩批，第一批32只，主要用于觀察溫和灸和TDP兩種方法對創(chuàng)面愈合時間和創(chuàng)面愈合率的影響。先將32只大鼠腹腔注射鹽酸氯胺酮150 mg/kg，麻醉后造模區(qū)(腰椎正中偏上)剪毛，用直徑20mm塑料瓶蓋在造模區(qū)標記造模面積，新潔爾滅酊棉球皮膚消毒，沿標記線剪去皮下組織至肌筋膜，止血，消毒紗布敷料覆蓋傷口。再隨機分為4組：空白對照組(以下簡稱為空白組)、溫和灸治療組(以下簡稱為溫灸組)、特定電磁波治療儀(

3、TDP)治療組(以下簡稱為TDP組)、模型組，每組各8只，分籠單獨飼養(yǎng)；第二批80只，主要用于觀察不同時間各組大鼠血清IL-6、IGF-1的含量和創(chuàng)面組織表面巨噬細胞數(shù)、MVD及Ⅰ、Ⅲ型膠原含量的變化。將其隨機分成4組，即正常對照組(以下簡稱為正常組)8只、溫灸組24只、TDP組24只、模型組24只，其中溫灸組、TDP組、模型組造模同上，正常組不做任何處理，各組均分籠單獨飼養(yǎng)。自造模次日起，溫灸組、TDP組及模型組均肌注氫化可的松琥珀酸

4、鈉100 mg/kg，隔日1次，共注射7次。自造模次日起開始治療，溫灸組將大鼠置于自制灸盒中，用艾條溫和灸創(chuàng)面局部及雙側腎俞、足三里穴各15min；TDP組將大鼠置于自制灸盒中，TDP照射創(chuàng)面局部及雙側腎俞、足三里穴各15min；模型組、正常組及空白組均將大鼠置于自制灸盒中15min，不施加任何干預。各組治療期間均自由進食飲水，動物飼料是由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供的普通全價飼料。
　　各實驗組大鼠的創(chuàng)面愈合時間由專人記錄，并分

5、別于造模后第3天、7天、10天、14天測量創(chuàng)面面積，其由專人專機固定高度拍攝，photoshopCS3軟件分析而成。于造模次日早晨，檢測實驗組大鼠血清IL-6的含量，造模后第7天、10天、14天，分別檢測相應實驗組大鼠血清IGF-1的含量和創(chuàng)面組織中表面巨噬細胞數(shù)、MVD及Ⅰ、Ⅲ型膠原的含量等指標。
　　所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量數(shù)據(jù)以(x±s)表示，組間差異用t檢驗。
　　結果：
　　1溫和

6、灸對大鼠創(chuàng)面愈合時間(天)的影響
　　治療后，大鼠創(chuàng)面愈合時間(天)溫灸組、TDP組、模型組(18.20±1.48、21.40±2.07、25.40±1.51)均顯著長于空白組(15.20±1.30)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，說明大鼠難愈性創(chuàng)面模型復制成功；溫灸組大鼠創(chuàng)面愈合天數(shù)明顯短于TDP組和模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；TDP組與模型組比較，差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　2造模次日各組

7、大鼠血清IL-6含量(pg/ml)的比較
　　造模次日，大鼠血清IL-6含量(pg/ml)溫灸組、TDP組、空白組和模型組(80.77±4.68、80.29±4.68、77.56±7.62、76.38±6.04)四組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明4組大鼠的受損程度無明顯差異，具有可比性。
　　3溫和灸不同時間對大鼠創(chuàng)面愈合率(％)的影響
　　3.1造模后第3天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面愈合率(％)的影響

8、　　造模后第3天時，大鼠創(chuàng)面的愈合率(％)溫灸組、空白組(18.86±1.68、19.71±2.06)高于模型組(16.86±1.57)2％以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TDP組(18.14±1.35)與模型組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；溫灸組、TDP組、空白組三組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　3.2造模后第7天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面愈合率(％)的影響
　　造模后第7天時，大鼠創(chuàng)面愈合率(

9、％)溫灸組、TDP組、模型組(54.00±3.74、48.14±4.49、36.43±2.37)均低于空白組(63.71±2.87)9％以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；溫灸組高于TDP組、模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TDP組高于模型組，差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3.3造模后第10天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面愈合率(％)的影響
　　造模后第10天時，大鼠創(chuàng)面愈合率(％)溫灸組、TDP組、模型組(

10、66.43±3.1、57.29±2.14、44.29±2.93)均低于空白組(80.57±3.26)14％以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；溫灸組高于TDP組、模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TDP組高于模型組，差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3.4造模后第14天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面愈合率(％)的影響
　　造模后第14天時，大鼠創(chuàng)面愈合率(％)溫灸組、TDP組、模型組(86.43±3.45、76.2

11、9±5.41、60.0±2.77)均低于空白組(95.29±2.56)9％以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；溫灸組高于TDP組、模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TDP組高于模型組，差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　4溫和灸不同時間對大鼠血清IGF-1含量(ng/ml)的影響
　　4.1造模后第7天時，溫和灸對大鼠血清IGF-1含量(ng/ml)的影響
　　造模后第7天時，大鼠血清IGF-1含量(

12、ng/ml)溫灸組(55.43±12.78)高于TDP組、模型組、正常組(40.72±10.20、40.39±6.91、36.17±8.71)14 ng/ml以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TDP組、模型組、正常組三組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　4.2造模后第10天時，溫和灸對大鼠血清IGF-1含量(ng/ml)的影響
　　造模后第10天時，大鼠血清IGF-1含量(ng/ml)溫灸組、TDP組、模型

13、組(324.16±72.22、119.46±47.69、60.37±5.84)高于正常組(36.17±8.71)24 ng/ml以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)；溫灸組高于TDP組、模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；TDP組高于模型組，差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　4.3造模后第14天時，溫和灸對大鼠血清IGF-1含量(ng/ml)的影響
　　造模后第14天時，大鼠血清IGF-1含量(

14、ng/ml)溫灸組、TDP組、模型組(89.68±10.43、99.43±12.17、108.25±19.78)均高于正常組(36.17±8.71)53ng/ml以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；溫灸組低于TDP組、模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TDP組低于模型組，差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　5溫和灸不同時間對大鼠創(chuàng)面巨噬細胞計數(shù)(個/mm2)的影響
　　5.1造模后第7天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面

15、巨噬細胞計數(shù)(個/mm2)的影響
　　造模后第7天時，平均一視野大鼠創(chuàng)面巨噬細胞計數(shù)(個/mm2)溫灸組、TDP組、模型組(15.0±0.76、14.25±1.17、11.00±0.76)均多于正常組(4.50±1.20)6.5個以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；溫灸組多于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；溫灸組與TDP組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；TDP組與模型組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

16、
　　5.2造模后第10天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面巨噬細胞計數(shù)(個/mm2)的影響
　　造模后第10天時，平均一視野大鼠創(chuàng)面巨噬細胞計數(shù)(個/mm2)溫灸組、TDP組、模型組(25.00±2.93、21.75±1.58、16.75±1.91)均多于正常組(4.50±1.20)12個以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；溫灸組多于TDP組、模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TDP組多于模型組，差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.

17、05)。
　　5.3造模后第14天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面巨噬細胞計數(shù)(個/mm2)的影響
　　造模后第14天時，平均一視野大鼠創(chuàng)面巨噬細胞計數(shù)(個/mm2)溫灸組、TDP組、模型組(11.75±1.20、15.00±1.31、18.25±1.58)均多于正常組(4.50±1.20)7個以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；溫灸組少于TDP組、模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TDP組少于模型組，差異亦有統(tǒng)計學意義(P

18、<0.05)。
　　6溫和灸不同時間對大鼠創(chuàng)面。MVD(個/cm2)的影響
　　6.1造模后第7天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面MVD(個/cm2)的影響
　　造模后第7天時，大鼠創(chuàng)面平均MVD(個/cm2)溫灸組、TDP(15.60±1.34、14.60±1.14)均高于正常組(10.80±1.48)3個/cm2以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；模型組(12.80±1.30)高于正常組2個/cm2以上，差異有統(tǒng)計學意義(

19、P<0.05)；溫灸組高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；TDP組高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；溫灸組與TDP組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　6.2造模后第10天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面MVD(個/cm2)的影響
　　造模后第10天時，大鼠創(chuàng)面平均MVD(個/cm2)溫灸組、TDP組、模型組(22.20±1.64、19.60±1.14、16.20±1.30)均高于正常組(10.80±1.

20、48)5個/cm2以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；溫灸組高于TDP組、模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；TDP組高于模型組比較，差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　6.3造模后第14天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面MVD(個/cm2)的影響
　　造模后第14天時，大鼠創(chuàng)面平均MVD(個/cm2)溫灸組、TDP組、模型組(12.40±1.13、14.50±1.24、19.30±1.67)均高于正常組(10.80±1

21、.48)1.6個/cm2以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)；溫灸組低于TDP組、模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05；P<0.01)；TDP組低于模型組，差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　7溫和灸不同時間對大鼠創(chuàng)面Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白表達的影響
　　7.1造模后第7天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面Ⅰ型膠原蛋白表達的影響
　　造模后第7天時，大鼠創(chuàng)面Ⅰ型膠原蛋白表達的平均光密度溫灸組、TDP組(0.075±

22、0.116、0.064±0.010)均高于模型組(0.035±0.061)0.02以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；溫灸組與TDP組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　7.2造模后第7天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面Ⅲ型膠原蛋白表達的影響
　　造模后第7天時，大鼠創(chuàng)面Ⅲ型膠原蛋白表達的平均光密度溫灸組、TDP組(0.070±0.009、0.063±0.007)均高于模型組(0.031±0.009)0.02以上，差異有統(tǒng)

23、計學意義(P<0.01)；溫灸組與TDP組比較，差異性無統(tǒng)計意義(P>0.05)。
　　7.3造模后第14天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面Ⅰ型膠原蛋白表達的影響
　　造模后第14天時，大鼠創(chuàng)面Ⅰ型膠原蛋白表達的平均光密度溫灸組、TDP組(0.182±0.116、0.119±0.030)均高于模型組(0.075±0.006)0.04以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；溫灸組高于TDP組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　

24、7.4造模后第14天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面Ⅲ型膠原蛋白表達的影響
　　造模后第14天時，大鼠創(chuàng)面Ⅲ型膠原蛋白表達的平均光密度溫灸組、TDP組(0.188±0.356、0.120±0.316)均高于模型組(0.065±0.009)0.05以上，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；溫灸組高于TDP組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　7.5造模后第7、14天時，溫和灸對大鼠創(chuàng)面Ⅰ/Ⅲ比值的影響
　　造模后第7天時，與正常

25、組大鼠創(chuàng)面Ⅰ/Ⅲ比值(0.97±0.159)比較，溫灸組、TDP組(1.09±0.247、1.02±0.239)差異無統(tǒng)計意義(P>0.05)，模型組(1.23±0.351)差異有統(tǒng)計意義(P<0.05)；溫灸組與模型組比較差異無意義(P>0.05)；TDP組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。造模后第14天時，溫灸組、TDP組(1.02±0.231、0.87±0.217)與正常組比較，差異無統(tǒng)計意義(P>0.05)；模型組

26、(1.20±0.270)與正常組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；溫灸組、TDP組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)；溫灸組與TDP組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論：
　　1溫和灸和TDP均能縮短大鼠難愈性創(chuàng)面的愈合時間，溫和灸縮短時間更明顯。
　　2溫和灸和TDP均可調節(jié)不同時期難愈性創(chuàng)面大鼠血清IGF-1的含量。早期可通過調節(jié)血小板和成纖維細胞釋放IGF-1的活性

27、，提高其血清含量，進而刺激血管內(nèi)皮細胞遷移到創(chuàng)傷部位，促使新生血管的形成，繼而促進創(chuàng)面的愈合；晚期又可降低其血清含量，促進過度增生的膠原降解，減少瘢痕的形成。
　　3溫和灸和TDP均可調節(jié)不同時期大鼠難愈性創(chuàng)面巨噬細胞的數(shù)量。早期可提高創(chuàng)面巨噬細胞數(shù)，促進吞噬和清除異物與衰老傷亡細胞的功能，同時可以通過其分泌的多種生物活性物質刺激組織血管生成，促進創(chuàng)面愈合；晚期又可降低創(chuàng)面巨噬細胞數(shù)，凸顯其調節(jié)結締組織基質的合成和分解的作用，進而

28、使膠原反復溶解沉積和更新，達到組織改建、減少瘢痕的目的。
　　4溫和灸和TDP均可調節(jié)不同時期大鼠難愈性創(chuàng)面MVD。早期可提高創(chuàng)面MVD，改善局部微循環(huán)，促使受損組織得以修復；晚期又可降低創(chuàng)面MVD，避免瘢痕組織過度增生，改善修復質量。
　　5溫和灸和TDP均可提高大鼠難愈性創(chuàng)面Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的含量，通過調節(jié)成纖維細胞的活性，促進Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的合成與分泌，繼而使創(chuàng)面得到修復，同時可以調節(jié)創(chuàng)面增生組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的