P物質(zhì)對哮喘動物模型氣道阻力的影響及鹽酸丙卡特羅對其干預(yù)作用.pdf

1、支氣管哮喘（哮喘）是由多種炎癥細(xì)胞及炎癥因子參與的以氣道高反應(yīng)為特征的炎癥性疾病，是全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅公眾健康的慢性疾病，其發(fā)病機(jī)制有氣道慢性炎癥、氣道高反應(yīng)（AHR）、不可逆性的氣道重塑、神經(jīng)反應(yīng)、變態(tài)反應(yīng)、遺傳等等，多種機(jī)制之間相互關(guān)聯(lián)、錯綜復(fù)雜，迄今尚不十分清楚。以氣道的慢性炎癥、氣道高反應(yīng)性和不可逆性氣道重塑（airway remodeling）為特點(diǎn)。最近的研究顯示，嗜酸性粒細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤可造成氣道上皮脫落、

2、黏液分泌、血管滲出及感覺神經(jīng)末梢裸露。因此，有國外學(xué)者提出了與哮喘有關(guān)的氣道神經(jīng)軸突反射概念，使人們?nèi)找嬲J(rèn)識到神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)之間存在著密切的聯(lián)系，它們相互影響，相互調(diào)節(jié)。在此過程中，神經(jīng)肽起到了重要的作用。迄今為止在呼吸道已確定的神經(jīng)肽將近20種，感覺神經(jīng)肽就是其中的一類。其中P物質(zhì)（Substance P，SP）就是導(dǎo)致哮喘氣道神經(jīng)源性炎癥產(chǎn)生的一種重要的感覺神經(jīng)肽。P物質(zhì)是由感覺神經(jīng)末梢釋放的一種小肽，是一種炎性作用很強(qiáng)的速激肽

3、，對氣道具有廣泛的生理效應(yīng)，如強(qiáng)烈地收縮支氣管平滑肌，增加微血管壁的通透性，引起血漿蛋白外滲和組織水腫，加重氣道阻塞，促進(jìn)粘液分泌及粘液栓的形成，這些改變都與哮喘的氣道病理結(jié)構(gòu)相似。氣道高反應(yīng)（airway hyperresponsiveness，AHR）是氣道受到外界刺激時表現(xiàn)出的過強(qiáng)、過早的收縮反應(yīng)，是支氣管哮喘的重要臨床特征，與氣道的慢性炎癥有關(guān)。以往認(rèn)為副交感神經(jīng)緊張性增高是引起氣道高反應(yīng)性的主要原因，但是現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，除了經(jīng)典的膽

4、堿能神經(jīng)系統(tǒng)及腎上腺素能神經(jīng)系統(tǒng)支配外，尚有非腎上腺素能非膽堿能神經(jīng)（NANC）的支配，包括興奮性神經(jīng)纖維和抑制性神經(jīng)纖維。興奮性神經(jīng)纖維在肺內(nèi)主要為感覺神經(jīng)，其末梢可釋放一些速激肽，包括P物質(zhì)、神經(jīng)激肽A（NKA）、神經(jīng)激肽B（NKB）及降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）。這些肽類具有很強(qiáng)的致炎作用，如引起血管通透性增加、黏液分泌及氣管平滑肌痙攣等。P物質(zhì)是炎性作用很強(qiáng)的速激肽，在氣道平滑肌、血管內(nèi)皮細(xì)胞均發(fā)現(xiàn)P物質(zhì)免疫反應(yīng)神經(jīng)纖維及其受體

5、。體外試驗顯示，P物質(zhì)可刺激肥大細(xì)胞釋放介質(zhì)趨化炎性細(xì)胞，增強(qiáng)白三烯作用及刺激氣道平滑肌收縮。氣道炎癥也可促進(jìn)P物質(zhì)的釋放，當(dāng)氣道上皮損傷的時候，炎性介質(zhì)作用于裸露的感覺神經(jīng)末梢，通過軸突反射致使P物質(zhì)釋放，加重炎癥反應(yīng)，參與哮喘神經(jīng)性氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性的形成。以往的較多研究表明P物質(zhì)主要通過引起氣道平滑肌收縮，增加血管外滲，促進(jìn)黏液分泌及各種炎癥介質(zhì)釋放等作用參與哮喘的病理生理過程。本課題旨在研究P物質(zhì)對哮喘動物模型氣道阻力及與哮

6、喘相關(guān)的炎癥介質(zhì)的合成和釋放是否有影響，以及鹽酸丙卡特羅對其是否有干預(yù)作用。這些問題的解決，將使我們進(jìn)一步了解P物質(zhì)在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用，為尋求治療哮喘的方法提供有力的理論依據(jù)。
　　 實驗方法：
　　 采用卵蛋白（OVA）輔以百日咳桿菌菌苗和氫氧化鋁為佐劑注射致敏大鼠，霧化吸入激發(fā)制作哮喘大鼠模型。利用AniRes2005肺功能儀測定氣道阻力，并計數(shù)各組支氣管肺泡灌洗液（BALF）中的細(xì)胞總數(shù)及細(xì)胞分類，且運(yùn)用免疫組

7、織化學(xué)方法測定嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子（Eotaxin）在肺內(nèi)的表達(dá)，最終運(yùn)用日本MetaMorph/BX41圖像分析系統(tǒng)對結(jié)果進(jìn)行分析。
　　 實驗結(jié)果：
　　 1、氣道阻力檢測結(jié)果顯示
　　 哮喘組大鼠對Ach的濃度反應(yīng)曲線明顯上移，其呼氣阻力和吸氣阻力顯著高于正常組（P<0.05），表明哮喘組大鼠對Ach的氣道反應(yīng)性顯著高于正常對照組，同時也表明哮喘模型建立成功。P物質(zhì)組對Ach的濃度反應(yīng)曲線顯著高于哮喘組（P

8、<0.05），提示P物質(zhì)可增加哮喘大鼠的氣道反應(yīng)性，鹽酸丙卡特羅組對Ach的濃度反應(yīng)曲線介于哮喘組和正常組之間，提示鹽酸丙卡特羅可降低由P物質(zhì)引起的氣道阻力的增加（P<0.05）。
　　 2、支氣管肺泡灌洗液（BALF）中細(xì)胞總數(shù)及分類計數(shù)
　　 P物質(zhì)組大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及細(xì)胞分類計數(shù)都顯著高于哮喘模型組（P<0.05），哮喘組大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞（Eos）均較正

9、常對照組顯著增高（P<0.05）。鹽酸丙卡特羅組大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及細(xì)胞分類計數(shù)均較哮喘組減低（P>0.05）。
　　 3、免疫組織化學(xué)染色
　　 正常對照組Eotaxin的光密度為：0.2678±0.0076，哮喘組Eotaxin的光密度為：0.2788±0.0020，P物質(zhì)組Eotaxin的光密度為1.1499±0.1150，鹽酸丙卡特羅治療組Eotaxin的光密度為：0.2018±0.0035。