馬鈴薯青枯病抗性SRAP標記的篩選及蛋白酶抑制子Ⅰ基因片段的克隆.pdf

1、青枯病是由茄科雷爾氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一種毀滅性的細菌性土傳病害，在熱帶、亞熱帶、部分溫帶、甚至一些冷涼地區(qū)普遍發(fā)生，寄主范圍涉及44科300多種植物，其中包括很多重要的經濟作物，如馬鈴薯、番茄、花生和煙草。青枯病作為馬鈴薯的主要病害，常年在我國南方、西南和中原地區(qū)流行。迄今為止，馬鈴薯栽培種中尚未發(fā)現(xiàn)有效的青枯病抗源，僅在一些二倍體野生種和原始栽培種中存在有青枯病抗性，其中原始栽培種Solanum

2、phureia具有高抗特性，成為馬鈴薯抗青枯病育種的主要抗性來源。但由于青枯病抗性表現(xiàn)出復雜的寄主、環(huán)境、病原小種的互作，因此對于青枯病抗性具體的遺傳機制還不甚清楚。這一方面降低了田間抗性鑒定的效率和準確性，另一方面阻礙了抗病品種選育的進程。通過篩選與抗性基因或性狀緊密連鎖的分子標記，在育種過程中可以實現(xiàn)對抗性位點的直接選擇，避免煩瑣的田間接種鑒定，加速抗性基因的滲入和聚合，大大提高育種效率。另外，本實驗室篩選的與青枯病抗性連鎖的RAP

3、D標記S27位于蛋白酶抑制子Ⅰ基因TATA-box上游約1500bp，因此蛋白酶抑制子類的基因可能在馬鈴薯青枯病防御中扮演著重要的角色。 本試驗利用具有青枯病抗性的原始栽培種S.phureia及野生種S. vernei所產生的2個二倍體分離群體(CE和ED)，并采用新型標記SRAP技術，結合群分法(BulkedSegregant.Analysis，BSA)策略，篩選與青枯病抗性緊密連鎖的分子標記。結果顯示，從88對引物組合中篩選

4、得到一個與青枯病抗性連鎖的SRAP標記M32。對于ED群體，標記M32與青枯病抗性位點的圖譜距離為10.2 cM。對于CE群體，標記M32與青枯病抗性位點的圖譜距離為17.3cM。對M32的選擇準確性發(fā)現(xiàn)，在ED群體中，標記M32選擇的準確率為89.86％，在CE群體中，標記M32選擇的準確率為83.33％。對于兩個群體的總體準確率達到87.62％。 根據檢索得到的蛋白酶抑制子I基因部分序列信息設計引物，通過特異PCR及TAIL