以納米粒子為佐劑的屋塵螨疫苗免疫治療的實驗研究.pdf

1、目的：建立屋塵螨哮喘動物模型，比較分別用屋塵螨粗浸液、重組Der P 2、包被rDer P2納米粒子進(jìn)行免疫治療的療效，為變態(tài)反應(yīng)性疾病的免疫治療提供新的思路。 方法：首先利用PLGA(聚乳酸-羥乙酸)制備包被重組Der P2的納米粒子。其次，進(jìn)行實驗動物分組：近交系清潔級6～8周齡BALB／c小鼠40只，體重18～20克，隨機(jī)分配為：A陰性對照組，B陽性對照組，C粗浸液治療組(簡稱：粗浸液組)，DrDer P2治療組(簡稱：r

2、Der P2組)，E包裹rDer P2納米粒子治療組(簡稱：納米粒子組)，每組8只，雌雄各半。哮喘模型建立及干預(yù)措施：第0、7、14天腹膜內(nèi)注射(腹腔注射，i.P.)0.1mg／ml屋塵螨變應(yīng)原粗浸液與10mg／ml AI(OH)<,3>生理鹽水的混懸液100μ1；第28～30天對C、D、E組分別給予i.p.1mg／ml屋塵螨粗浸液100μl、lmg／ml rDer P2溶液100 μ1、lmg／ml包被rDer P2納米粒子溶液100

3、μ1進(jìn)行治療；第44～49天B、C、D、E組給予5mg／ml屋塵螨粗浸液100μ1鼻腔滴入(i.n.)方式激發(fā)，A組一直相應(yīng)給予生理鹽水處理；第51天處死各組動物。以酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)的方法檢測各組實驗動物血清中IgE、IgGl、IgG2a的水平，以及支氣管肺泡灌洗液(BALF)與脾細(xì)胞培養(yǎng)后上清液(SCCS)中細(xì)胞因子IL-4、IFN-γT及IL-10水平，并計數(shù)BALF中細(xì)胞總數(shù)與分類細(xì)胞數(shù)，制備肺組織病理切片以觀察其病

4、理改變，并選擇視野用顯微攝像儀拍照。 結(jié)果：添加鋁佐劑的屋塵螨變應(yīng)原致敏的小鼠在特異性變應(yīng)原的連續(xù)激發(fā)下，肺組織產(chǎn)生明顯的炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為BALF中細(xì)胞總數(shù)增加以及炎癥細(xì)胞所占比例及絕對計數(shù)升高，且以分泌Th2型細(xì)胞因子如IL-4為主。血清IgE、IgGl水平升高。肺組織病理切片觀察到支氣管、細(xì)支氣管上皮下和小血管周圍有明顯的炎性細(xì)胞浸潤，以嗜酸性粒細(xì)胞為主，氣道上皮結(jié)構(gòu)紊亂，有部分脫落，部分可見粘液栓，上皮下充血水腫明顯，肺泡

5、間質(zhì)增厚，也可見到炎性細(xì)胞浸潤。給予相應(yīng)免疫治療后，肺組織炎癥反應(yīng)明顯減輕，表現(xiàn)為BALF及SCCS中細(xì)胞總數(shù)減少，炎癥細(xì)胞數(shù)減少，Th1型細(xì)胞因子如IFN-γ占主導(dǎo)；血清IgE、IgG1水平降低，IgG2a水平升高(以E組最高)；肺組織病理切片觀察到細(xì)胞浸潤程度明顯減輕，氣道結(jié)果基本恢復(fù)正常。 結(jié)論：本實驗研究成功的建立了小鼠哮喘模型。用屋塵螨粗浸液及包被rDer p2的納米粒子進(jìn)行免疫治療比用rDerp2進(jìn)行免疫治療的效果好