納米-微米球疫苗遞送系統(tǒng)免疫佐劑效應(yīng)的研究.pdf

1、生物材料疫苗遞送系統(tǒng)的免疫佐劑效應(yīng)在增強(qiáng)抗原或免疫增強(qiáng)劑的免疫應(yīng)答方面具有重要作用。較常規(guī)載體，納米/微米球形顆粒疫苗遞送系統(tǒng)可高效包載抗原及免疫增強(qiáng)劑，增強(qiáng)抗原穩(wěn)定性，促進(jìn)抗原遞呈細(xì)胞(antigen presenting cell，APC)對(duì)抗原的胞吞，加工，促進(jìn)抗原的交叉呈遞，引起更強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。本課題以高分子生物材料為載體，負(fù)載抗原后構(gòu)建抗原遞送系統(tǒng)，研究其體內(nèi)外的免疫反應(yīng)與佐劑機(jī)制。研究?jī)?nèi)容包括以下三個(gè)方面:

2、r>　　1)負(fù)載百日咳毒素(PTd)的PLGA納米/微米球疫苗的制備及其免疫學(xué)機(jī)制研究。近年來(lái)，美國(guó)、澳大利亞、英國(guó)等國(guó)家，具高致病率、致死率的百日咳大量復(fù)發(fā)，研發(fā)有效預(yù)防百日咳新型疫苗具有重大意義。以FDA認(rèn)證，具有良好生物相容性的聚乳酸-聚羥基乙酸(poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA)為載體，以脫毒百日咳毒素(Pertussis Toxin，PTd)為抗原，經(jīng)雙乳化法制備PTdPLGA納米/微米球混

3、合制劑(PTd PLGA NP./MP.)。較裸抗原，PTd PLGA NP./MP.疫苗制劑有效地促進(jìn)了抗原被巨噬細(xì)胞的吞噬。小鼠體內(nèi)免疫結(jié)果表明，較裸抗原，PTd PLGA NP./MP.引起的特異性IgG分泌無(wú)顯著性差異，但可是顯著增強(qiáng)脾臟淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ，IL-17。因此，PTd PLGA NP./MP.可引起更加平衡地Th1/Th17免疫應(yīng)答，可作為替代無(wú)細(xì)胞型百日咳疫苗的新選擇。
　　(2)酸敏感PEDG

4、納米顆粒遞送卵清白蛋白（Ovalbumin，OVA）及其免疫學(xué)效應(yīng)研究。免疫原性弱及免疫應(yīng)答持續(xù)時(shí)間短是當(dāng)前亞單位蛋白疫苗的主要缺點(diǎn)。此部分工作中，我們以胍基修飾的甲氧基聚乙二醇-聚（2-（二異丙基氨基）-乙基甲基丙烯酸酯）-聚（2-（胍基）乙基甲基丙烯酸酯）（monomethoxypoly（ethylene glycol）-block-poly(2-(diisopropylamino)ethylmethacrylate)-block-

5、poly(2-(guanidyl)ethylmethacrylate），mPEG-b-PDPA-b-PGEM，PEDG）為載體，該共聚物可在水中自組裝成為納米粒，通過(guò)靜電吸附和氫鍵共同作用負(fù)載OVA，制成疫苗Nano.OVA。酸性環(huán)境(pH≤6.3)PDPA段發(fā)生質(zhì)子化致納米粒解體從而實(shí)現(xiàn)抗原溶酶體逃逸。Nano.OVA可顯著促進(jìn)抗原被小鼠骨髓來(lái)源的樹突狀細(xì)胞BMDCs捕獲，上調(diào)BMDCs表面分子CD40，CD86，CCR7的表達(dá)并促進(jìn)

6、其分泌細(xì)胞因子IL-12。另外，Nano.OVA促進(jìn)了巨噬細(xì)胞(Raw264.7)分泌細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-10。納米載體的引入能夠延長(zhǎng)抗原在接種部位及回流淋巴結(jié)的滯留時(shí)間。小鼠皮內(nèi)免疫接種后，與裸OVA相比，Nano.OVA大大提高了抗原特異性抗體IgG滴度，和細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2的分泌，引起了以IgG2a為主的Th1型體液免疫應(yīng)答。Nano.OVA顯著性的增強(qiáng)了OVA的交叉呈遞反應(yīng)，促進(jìn)抗原特異性CD8+T細(xì)胞

7、增殖?？傊?，酸敏感PEDG納米粒子作為蛋白疫苗遞送系統(tǒng)，可有效引起較強(qiáng)的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。
　　(3)新型可降解陽(yáng)離子納米載體的佐劑效應(yīng)機(jī)制。以側(cè)鏈胍基修飾的聚乙二醇-聚己內(nèi)酯(PEG-PCL)為載體，考察表面電荷對(duì)陽(yáng)離子納米粒免疫佐劑效果的影響。經(jīng)研究，陽(yáng)離子納米粒經(jīng)過(guò)細(xì)胞膜凹陷小窩介導(dǎo)內(nèi)吞方式進(jìn)入BMDCs。表面電荷增加可顯著性上調(diào)BMDCs表面分子CD86、CD40、MHCⅡ及CCR7的表達(dá)。納米粒負(fù)載OVA后，抗原OVA