

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
構(gòu)建粉塵螨I類變應(yīng)原(Derf1)瞬時(shí)表達(dá)載體TRBO-Derf1,觀察其在煙草中的表達(dá)并探討煙草表達(dá)的Derf1疫苗免疫治療過(guò)敏性哮喘的療效。
方法:
1.重組質(zhì)粒TRBO-Derf1的構(gòu)建及在煙草葉片中的表達(dá)
以粉塵螨總RNA為模板,采用RT-PCR方法擴(kuò)增Derf1基因并定向克隆到瞬時(shí)表達(dá)載體TRBO,轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)
2、GV3101株后,抽提質(zhì)粒進(jìn)行酶切及PCR鑒定。將含TRBO-Derf1重組質(zhì)粒的GV3101注射本氏煙葉片,SDS-PAGE電泳檢測(cè)注射3、4、5、6天后Derf1的表達(dá)。
2.煙草表達(dá)的粉塵螨I類變應(yīng)原對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥的免疫治療研究
100只BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組,分別為PBS組即陰性對(duì)照組,陽(yáng)性對(duì)照卵白蛋白(OVA)組,原核表達(dá)Derf1(pDerf1)組,煙草表達(dá)Derf1(tDerf1)組,
3、煙草表達(dá)蛋白免疫治療組(tDerf1-T),PBS組用PBS,其余4組分別用OVA、pDerf1、tDerf1、tDerf1致敏激發(fā)BALB/c小鼠,于0、7、14天腹腔注射致敏,第21天霧化吸入激發(fā),連續(xù)7天,24h后,各組小鼠引頸處死;保留tDerf1-T組繼續(xù)用tDerf1免疫治療;通過(guò)肺組織病理切片觀察小鼠肺部炎癥;收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)進(jìn)行白細(xì)胞及分類計(jì)數(shù);ELISA法檢測(cè)BALF、脾細(xì)胞培養(yǎng)上清(SCCS)的特異性
4、細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ和血清中變應(yīng)原特異性IgE、IgG1抗體濃度。
結(jié)果:
1.重組質(zhì)粒TRBO-Derf1的構(gòu)建及在煙草葉片中的表達(dá)
電泳及測(cè)序表明Derf1基因克隆成功,大小為627bp。經(jīng)PCR及酶切反應(yīng)證實(shí)重組質(zhì)粒TRBO-Derf1成功轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌。SDS-PAGE電泳檢測(cè)表明,該蛋白于第5和6天在煙草葉片中高表達(dá)。
2.煙草表達(dá)
5、的粉塵螨I類變應(yīng)原對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥的免疫治療研究
煙草表達(dá)蛋白免疫治療組肺部變態(tài)反應(yīng)性炎癥病理變化較模型組明顯減輕;BALF中的細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、IL-4、IL-5、IL-17、血清抗原特異性IgE抗體和脾細(xì)胞分泌IL-4、IL-5、IL-17均低于陽(yáng)性對(duì)照組;BALF和SCCS中IL-2、IFN-γ含量均高于陽(yáng)性對(duì)照組。
結(jié)論:
構(gòu)建的瞬時(shí)表達(dá)重組載體TRBO-Derf1成功表達(dá)于
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 粉塵螨Ⅰ、Ⅱ類變應(yīng)原的克隆、表達(dá)研究.pdf
- 變應(yīng)原免疫治療進(jìn)展2016
- 粉塵螨抗原免疫治療小鼠結(jié)腸癌的初步研究.pdf
- 粉塵螨滴劑舌下免疫治療兒童過(guò)敏性哮喘的臨床研究.pdf
- 粉塵螨主要變應(yīng)原Der f 1基因的克隆與表達(dá)研究.pdf
- 粉塵螨變應(yīng)原Derf2、Derf5基因的克隆表達(dá)及免疫學(xué)初步研究.pdf
- 粉塵螨疫苗對(duì)粉塵螨變應(yīng)原誘導(dǎo)的小鼠氣道變態(tài)反應(yīng)炎癥的影響及其機(jī)制研究.pdf
- 粉塵螨舌下含服疫苗對(duì)粉塵螨變應(yīng)原誘導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)性哮喘的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 屋塵螨特異性免疫治療抑制IgE易化變應(yīng)原結(jié)合的檢測(cè)方法的建立和驗(yàn)證.pdf
- 對(duì)接受安脫達(dá)變應(yīng)原免疫治療哮喘患者的調(diào)查.pdf
- 以TLR7激動(dòng)劑為佐劑免疫治療粉塵螨過(guò)敏性哮喘模型的研究.pdf
- 兒童氣道過(guò)敏性疾病的變應(yīng)原特異性免疫治療
- 粉塵螨和熱帶無(wú)爪螨生殖系統(tǒng)形態(tài)學(xué)研究及變應(yīng)原定位.pdf
- 肝癌免疫治療
- 粉塵螨HSP60的基因克隆、表達(dá)及免疫學(xué)特性研究.pdf
- 塵螨的培養(yǎng)以及重組塵螨二類變應(yīng)原的活性研究.pdf
- 粉塵螨變應(yīng)原Der f 2的重組表達(dá)及其ELISA分析和豚鼠變應(yīng)性鼻炎模型中的應(yīng)用.pdf
- 免疫預(yù)防免疫治療
- 腫瘤免疫和免疫治療
- 放射治療聯(lián)合免疫治療
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論