新型免疫佐劑的研制及亞單位佐劑疫苗的免疫效力檢驗.pdf

1、疫苗免疫是現(xiàn)今預防動物傳染病的最有效的手段之一。動物疫苗的生產(chǎn)研究具有重大的社會經(jīng)濟效益。佐劑作為一種免疫增強劑，成為絕大部分疫苗不可或缺的一部分。新型佐劑也隨著疫苗市場的拓展，具有廣闊的前景。
　　 國內(nèi)佐劑研究不斷深入，有研究驗證了一些常規(guī)佐劑在亞單位疫苗中的應用效果，但自主研發(fā)的商品化佐劑較少，很多動物疫苗的生產(chǎn)依賴進口佐劑。傳統(tǒng)的乳化方法，增加了企業(yè)能耗，使得成本過高。
　　 本研究就是基于生產(chǎn)所需的高安全性、高

2、免疫增強性、低能耗、低成本的要求，設計研發(fā)了一組油乳劑佐劑和一款高通量制備的富含豬特異性CpG的佐劑，以期開發(fā)適合豬口蹄疫亞單位疫苗的商品化佐劑。
　　 本研究主要采用了HLB法對復合乳劑形成的各組配方進行篩選，確定最佳方案；在制備微乳劑佐劑時主要通過三元相圖法繪制微乳區(qū)域來尋求最優(yōu)配伍。
　　 復合油佐劑COA，為一款由更安全的油相成分和毒性較小的乳化劑混合而成的油佐劑，其乳化工藝及乳劑性質(zhì)類似法國Seppic生產(chǎn)的I

3、SA206佐劑，低速攪拌即可乳化；W/O/W劑型使乳劑即時、持續(xù)釋放抗原，用以迅速持久的免疫。
　　 MOM佐劑，為一款礦物油微乳佐劑，為自乳化體系。油水相混合均勻，即可形成納米級微乳，穩(wěn)定性極高。W/O劑型和極小顆粒有利于抗原的緩慢釋放提高免疫。
　　 MFM佐劑，為一款用可代謝動物油配制的微乳佐劑。作為MF59佐劑的改進配方，它同樣是自乳化體系，油水相混勻即可乳化，乳劑顆粒達到納米級，穩(wěn)定性極高。
　　 以上

4、3款油佐劑根據(jù)商品化佐劑即開即用的需求設計，乳化簡單，穩(wěn)定性強。
　　 CpG-sw佐劑，為一款通過基因工程手段，設計制備的富含豬特異性CpG基序的核酸佐劑，同時借助工程菌增殖提高CpG生產(chǎn)通量，提升了CpG的可利用度。
　　 本研究將試制的幾款佐劑合并胸腺素，形成制劑類、核酸類、蛋白類三類典型的佐劑系統(tǒng)，以傳統(tǒng)白油佐劑作為陽性對照，無佐劑抗原作為陰性對照分別與亞單位疫苗制成佐劑疫苗，免疫小鼠，經(jīng)體內(nèi)實驗，以初步篩選出合

5、適的亞單位疫苗佐劑。
　　 經(jīng)過動物實驗驗證，發(fā)現(xiàn)MOM組、白油陽性組和CpG-sw組小鼠在免疫初期出現(xiàn)全身反應，1～2日內(nèi)反應消失。MOM組和白油陽性組在注射部位產(chǎn)生硬結(jié)，難以消化，MOM硬結(jié)較小。其他組未見反應。制劑外相的親水性和佐劑本身的毒性影響到佐劑的安全性。
　　 從小鼠IgG抗體水平來看，MOM組、白油陽性組和CpG-sw組抗體水平最高，其他各組較陰性組也有明顯提高，發(fā)揮了佐劑作用。從脾細胞細胞因子濃度來看，