PTD-Foxp3融合蛋白的表達(dá)純化和生物學(xué)功能的初步研究.pdf

1、Foxp3屬于FOX(forkhead box)轉(zhuǎn)錄因子家族，對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatoryT cells Treg)的發(fā)生及生物學(xué)功能的發(fā)揮具有十分重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)表達(dá)外源性Foxp3可伎非調(diào)節(jié)性T細(xì)胞獲得調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表型及功能。
　　 蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(protein transduction domain，PTD)是HIV-1(humanimmunodeficiency virus type1)基因編碼的反式激活

2、蛋白(Trans-activatortranscription，TAT)中的一段具有穿膜功能的多肽，能夠攜帶外源性蛋白穿過(guò)幾乎所有的真核細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞漿和核內(nèi)。
　　 目的：構(gòu)建帶HIV-1 PTD序列的原核表達(dá)載體pET28a-PTD，表達(dá)小鼠PTD-Foxp3融合蛋白，并研究其對(duì)T細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：利用基因重組技術(shù)構(gòu)建pET28a-PTD原核表達(dá)載體及pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白表達(dá)載

3、體，并在大腸埃希菌Rosetta(DE3)中表達(dá)融合蛋白，經(jīng)Nj2+分離柱純化帶His標(biāo)簽的PTD-Foxp3融合蛋白。采用Western-blot技術(shù)鑒定所表達(dá)的PTD-Foxp3蛋白；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)確認(rèn)融合蛋白穿膜功能；通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)初步分析融合蛋白對(duì)T細(xì)胞活化增殖能力的調(diào)節(jié)。
　　 結(jié)果：成功地構(gòu)建了pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白表達(dá)載體，表達(dá)并純化了PTD-Foxp3融合蛋白。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析證實(shí)PTD