小分子化合物J2緩釋劑型藥代動力學及藥效學的實驗研究.pdf

1、目的：研究和比較小分子化合物J2兩種緩釋劑型.海藻酸鈉微球（Sodium alginate microspheres，SAM）及納米混懸液（nano-suspension，NS）在體外釋放情況和體內(nèi)眼部藥代動力學行為，觀察J2-NS結膜下注射對大鼠角膜移植排斥反應的作用并驗證其作用機理。
　　 方法：①體外釋藥性能研究：光學顯微鏡觀察J2-SAM的形態(tài)及大??；激光粒度掃描儀測量J2-NS的粒徑：高效液相色譜法測定J2-SAM和J

2、2-NS的載藥量以及在體外的累積釋放量。②體內(nèi)藥代動力學研究：實驗兔結膜下注射J2-SAM和J2-NS，分別于注藥后1d、3d、1w、2w、3w、4w后取角膜、房水、虹膜以及外周血，使用高效液相色譜儀檢測組織內(nèi)的藥物濃度，并使用WinNonlin藥代動力學軟件計算主要的藥代動力學參數(shù)。③藥效學研究：成年雌性Wistar大鼠為供體，SD大鼠為受體，建立同種異體穿透性角膜移植模型。手術大鼠隨機分成4組：A組為SD大鼠自體角膜移植結膜下空白溶

3、劑0.05ml注射組，16只；B組為同種異體角膜移植結膜下空白溶劑0.05ml注射組16只：C組為同種異體角膜移植結膜下空白溶劑0.05ml注射和1％CsA點眼組每日5次，16只；D組同種異體角膜移植結膜下注J2-NS 0.05mL，16只。術后記錄植片排斥指數(shù)（RI），比較各組大鼠角膜植片生存時間。角膜移植后7d、14d分別對各組大鼠術眼及同側頜下淋巴結行病理學檢查。④機理研究：以成年雌性Wistar大鼠作為供體，SD大鼠作為受體，建

4、立同種異體穿透性角膜移植模型。A組為正常SD大鼠結膜下空白溶劑0.05ml注射組，6只。手術大鼠隨機分成3組：B組為SD大鼠自體角膜移植結膜下空白溶劑0.05ml注射組，6只；C組為同種異體角膜移植結膜下空白溶劑0.05ml注射組6只；D組同種異體角膜移植結膜下注射1％J2-NS納米混懸液0.05ml，6只。各組動物分別于術后3d、1w、2w、3w，使用流式細胞儀檢測外周血中T細胞亞群分布情況并比較。
　　 結果：①體外釋藥性能

5、研究：J2-SAM和J2-NS平均粒徑分別為165.61±37.943μm和170nm；載藥量分別為0.12％和0.1％，兩種緩釋劑型在體外均有顯著的緩釋效果，釋藥量平穩(wěn)，基本上沒有突釋，緩釋時間持續(xù)30d以上；30d時累計釋放分別39.19％和32.91％。②體內(nèi)藥代動力學研究：J2-SAM和J2-NS兔結膜下注射后，在各組織內(nèi)緩慢均勻釋放，在角膜藥物濃度最高，在房水和虹膜內(nèi)的藥物濃度較低，全血中可以檢測到藥物濃度，在眼局部可以達到長

6、期緩釋效果。③藥效學研究：A組在觀察期內(nèi)未發(fā)生排斥；B、C、D組生存時間分別為10.75±1.60d、16.00±3.79d和14.33±2.93d，C、D兩組間比較無顯著性差異，與A、B組比較均有顯著性差異。角膜同種異體移植術后7d角膜基質(zhì)主要由多形核白細胞浸潤為主，14d時則以淋巴細胞浸潤為主，D組術后角膜植片各組織層中細胞成分和新生血管均較同期B組少。角膜同種異體移植術后移植同側的頜下淋巴結增生明顯，但用藥組弱于未用藥組。免疫組化

7、A組角膜未見CD4+、CD8+T細胞浸潤，角膜移植術后角膜基質(zhì)層可見核膜棕黃色物質(zhì)沉積的T細胞，同側頜下淋巴結內(nèi)淋巴結副皮質(zhì)區(qū)及濾泡問區(qū)陽性細胞增多，以B組最為明顯。④機理研究：B組各時間點外周血中淋巴細胞總CD3+T淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞以及CD4+/CD8+T淋巴細胞無顯著性差異；C組術后3d和1w總CD3+T淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞無顯著性差異，1w和2w總CD3+T淋巴細胞、CD

8、4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞數(shù)目增多，差異有顯著性；D組中，1w和2w時CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞無顯著增生。同一時間點橫向比較：3d、1w、2w時D組總CD3+T淋巴細胞明顯少于C組，有顯著性差異，而在第3w時D組與C組無明顯差別；CD4+T淋巴細胞在術后3d和1w時D組較C組比較數(shù)目少，但無顯著性差異。CD4+/CD8+比值，在3d、1w、3w時D組與C藥組比較均無顯著性差異。
　　 結論：①J2-SAM和

9、J2-NS粒徑均勻是良好的藥物載體，體外有良好的緩釋效應。②結膜下單次注射J2-SAM和J2-NS可以在眼部緩慢均勻的釋放，長期維持穩(wěn)定的藥物濃度，兩者藥代動力學參數(shù)無顯著性差異，但J2-Ns較J2-SAM更方便注藥和更易控制給藥劑量。③J2-NS結膜下注射有抗大鼠角膜移植排斥作用，效果與CsA相似。J2 J2-NS結膜下注射可見減輕角膜移植術后角膜植片和同側頜下淋巴結的細胞增生，抑制免疫應答。④大鼠自體角膜移植并不引起外周血T淋巴細胞