重組IFN-β大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的建立.pdf

1、目的：構(gòu)建大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，以獲得INF-β在大腸桿菌中的表達(dá)。 方法：采用PCR擴(kuò)增IFN-β基因片段，并通過EcoRI和BamHI酶切后用T<,4>DNA連接酶連接到PGEX4T-1質(zhì)粒中，構(gòu)建重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5a，提取質(zhì)粒經(jīng)雙酶切鑒定正確后，再轉(zhuǎn)化入表達(dá)宿主大腸桿菌BL21菌株。通過IPTG誘導(dǎo)IFN-β大量表達(dá)，表達(dá)蛋白經(jīng)過SDS-PAGE檢測(cè)。 結(jié)果：IFN-β基因的PCR產(chǎn)物通過瓊脂糖凝

2、膠電泳分析可見存在500bp左右的區(qū)帶，證明IFN-β基因的PCR結(jié)果成功。pGEX4T-1空質(zhì)粒經(jīng)酶切后大小由4.3Kb減小為4Kb的大片斷；重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌，經(jīng)培養(yǎng)后提取的質(zhì)粒經(jīng)酶切后發(fā)現(xiàn)有2個(gè)片斷，一個(gè)4Kb，另一個(gè)500bp左右；提取的質(zhì)粒經(jīng)PCR以后也檢出500bp左右的區(qū)帶。以上三個(gè)檢測(cè)結(jié)果證明重組成功。培養(yǎng)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的EcoliBL21，通過SDS-PAGE檢測(cè)出菌體粉碎提取液中存在一個(gè)46KD的蛋白質(zhì)，而陰性菌體沒