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文檔簡介
1、尖萼耬斗菜隸屬毛莨科唐松草亞科,在民間具有大量使用尖萼耬斗菜治療疾病的經(jīng)驗。我國東北地區(qū)用尖萼耬斗菜或本屬其它植物的流浸膏治療月經(jīng)不調(diào)、功能性子宮出血等婦科疾病。目前我國學者對該類群植物的研究及開發(fā)利用較少。本論文首先研究了不同提取方法對尖萼耬斗菜有效成分的富集的影響;然后研究了尖萼耬斗菜抗菌和抗氧化活性;接著,我們還系統(tǒng)的研究了不同的細胞破碎方法對細菌胞內(nèi)整體代謝物提取結(jié)果的影響,為代謝組學在中藥抑菌藥理研究的應(yīng)用奠定基礎(chǔ);最后,采用
2、新近發(fā)展的代謝組學技術(shù)結(jié)合主成分分析技術(shù),以已知不同機理的抗生素處理的金黃色葡萄球菌的胞內(nèi)代謝物為研究對象,建立了基于LC/MS代謝譜的抗菌模型,并且,基于此基礎(chǔ)推測出尖萼耬斗菜的有效成分的抗菌大致機理。 本論文的主要內(nèi)容如下: 一、首次系統(tǒng)的研究了尖萼耬斗菜的有效成分的提取方法。探討了有機溶劑提取、加速溶劑萃取、微波輔助提取及超聲波提取的各種影響因素,并篩選出較佳的工藝條件。實驗結(jié)果表明:加速溶劑萃取法用時短,有機溶劑
3、用量少,而且對環(huán)境污染??;索氏提取效率高,但是所需提取時間較長,與其他方法相比有機溶劑需求量較大;超聲提取所用設(shè)備簡單,價格低廉,但是需要對多個實驗參數(shù)進行優(yōu)化,以尋求最佳的提取條件;微波提取法,耗時較短是它最突出的特點,但是提取時溶劑揮發(fā)造成的影響也是不可忽視的。 二、比較了以不同溶劑提取尖萼耬斗菜得到的提取物對9種微生物的抑菌活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用不同溶劑得到的提取物對抑菌活性有很大差別;尖萼耬斗菜的醇提取物對各供試菌種均有很好
4、的抑菌作用;水提物次之;最低抑菌濃度的試驗表明:尖萼耬斗菜乙醇提取物對三種霉菌和表皮葡萄球菌的抑菌效果要弱于甲醇提取物,而對其它三種陰性菌和兩種陽性菌的抗菌效果強于甲醇提取物;可見尖萼耬斗菜中的化學成分具有很強的抑菌作用,是一種天然的抑菌劑。 三、研究了尖萼耬斗菜提取物的抗氧化性能。從IC50結(jié)果我們可以得出一個初步的結(jié)論,尖萼耬斗菜精制黃酮對DPPt{自由基的抑制能力>對超氧自由基的抑制能力>對羥基自由基的抑制能力>對過氧化氫
5、自由基的抑制能力;尖萼耬斗菜粗黃酮提取物對超氧自由基的抑制能力>對DPPH自由基的抑制能力>對羥基自由基的抑制能力>對過氧化氫自由基的抑制能力。尖萼耬斗菜黃酮提取物展示了良好的抗氧化性能,作為一種天然抗氧化劑有利用開發(fā)的前景。 四、超聲波破碎法是一種低成本,易操作的破碎方法。本章系統(tǒng)的研究了超聲波破碎方法中各種物理參數(shù)對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的破碎效果的影響。分別獲取了破碎兩種菌的最佳破碎條件:超聲波細菌破碎儀固定頻率為20
6、kHz,功率為400/350 W(金黃色葡萄球菌/大腸桿菌),菌體破碎時濃度為70/100 mg mL-1 (金黃色葡萄球菌/大腸桿菌),單次破碎時間為3 s,間歇時間為5 s,總破碎時間為450/350 S(金黃色葡萄球菌/大腸桿菌)。另一方面,通過實驗結(jié)果我們可以得到大腸桿菌比金黃色葡萄球菌更容易破碎這個結(jié)論。這章中我們還分別針對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌使用八種破碎方法:十二烷基硫酸鈉法、尿素法、冷甲醇、熱甲醇、高氯酸、堿法、滾珠法
7、和超聲波;并且用平板計數(shù)法和測定破碎后溶液中12種胞內(nèi)代謝物的含量,共同來評價各種方法的破碎效果。結(jié)合我們自身實驗要求和實驗條件我們選擇冷甲醇法為后續(xù)實驗所用破碎方法,為進一步工作奠定基礎(chǔ)。 五、傳統(tǒng)中藥已有幾千年的歷史,但是我們對中藥的作用機理知之甚少?;谝陨系难芯拷Y(jié)果,通過HPLC/DAD/ESI-MS獲取了九種已知作用模式的抗生素,尖萼耬斗菜及其四種單體的金黃色葡萄球菌的胞內(nèi)代謝譜,通過主成分分析探尋中藥尖萼耬斗菜的抗菌
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