蒜頭果有效成分及其生物活性研究.pdf

1、本論文以廣西特色林產(chǎn)資源蒜頭果為原料，系統(tǒng)進(jìn)行了蒜頭果果皮果肉、果殼、種仁和枝葉多個部位提取脂肪酸、揮發(fā)油、多糖、黃酮、木質(zhì)素、蛋白質(zhì)及抗氧化成分，考察了有效成分的抗腫瘤、抗氧化和抑菌多種生物活性，研究結(jié)果對廣西蒜頭果種植和綜合利用具有重要指導(dǎo)意義。主要研究內(nèi)容和取得的成果如下:
　　 (1)分別采用溶劑法索氏提取蒜頭果脂肪酸，水蒸氣蒸餾法提取蒜頭果揮發(fā)油，GC-MS聯(lián)用技術(shù)分析了甲脂化后脂肪酸和揮發(fā)油其化學(xué)成分組分，結(jié)果表明:

2、種仁中脂肪酸得率為60.5％±2.5％（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），鑒定出10種化合物，占總量的98.98％，主要化合物和相對含量分別為神經(jīng)酸（二十四碳烯-15-酸）55.70％、油酸（十八碳烯酸）23.81％、莽酸（二十二碳烯酸）13.13％;新鮮種仁、枝葉和果皮果肉中揮發(fā)油得率分別為0.1±0.02％、0.2±0.03％和1.1±0.12％。種仁揮發(fā)油中有15種成分被鑒定，占總量的99.90％，其中苯甲醇(58.42％)相對含量較高，苯甲醛(29.

3、66％)次之。枝葉揮發(fā)油中有8種成分被鑒定，占總量的99.87％，主要化學(xué)成分及相對含量分別為苯甲醛90.68％、苯甲醇2.95％、苯甲酸4.17％、扁桃腈0.07％。果皮果肉揮發(fā)油中有7種成分被鑒定，占總量的99.83％，主要化學(xué)成分及相對含量分別為苯甲醛87.15％、苯甲醇6.51％、扁桃腈5.66％，結(jié)果表明蒜頭果各部位均含苯甲醛和苯甲醇。
　　 (2)建立了苯酚-硫酸法測定蒜頭果渣多糖的分析方法。在單因素實驗基礎(chǔ)上，采用

4、響應(yīng)面法對蒜頭果渣多糖超聲波提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，在提取功率490 W、提取時間45 min、料液比1∶25(g·mL-1)的最佳工藝條件下，蒜頭果渣多糖的得率為5.02％。利用水提醇沉、Sevag法脫蛋白、大孔樹脂-聚酰胺脫色、DEAE-52纖維素離子交換柱、透析、凝膠SephadexG-100柱分離純化了蒜頭果粗多糖，制得兩個組份多糖GP-1和GP-2，HPGPC分析得到其分子量分別為42.95、2597kDa。HPLC分析蒜頭果多糖G

5、P-1中葡萄糖、鼠李糖、樹膠醛糖的摩爾比為:5.8∶3.2∶1，而GP-2中葡萄糖、鼠李糖、樹膠醛糖、甘露糖、果糖的摩爾比為13∶3.4∶1.6∶1∶1。體外抗腫瘤試驗結(jié)果顯示，GP-1和GP-2對鼻咽癌(CNE-1)和肺癌(H460)細(xì)胞均有一定的抑制作用，而對人正常肝細(xì)胞(HL-7702)基本無殺傷能力，GP-2對兩種癌細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于GP-1，對CNE-1最大抑制率為64.49％。
　　 (3)采用溶劑浸提法對蒜頭果葉和

6、蒜頭果葉渣總黃酮提取工藝進(jìn)行研究。結(jié)果表明，在最佳工藝條件下，蒜頭果葉和殘渣總黃酮得率分別為16.78％、12.31％。蒜頭果葉（渣）黃酮經(jīng)樹脂HPD400純化后總黃酮的含量分別達(dá)到79.80％、78.62％，純度提高了39.19％、43.97％。首次采用制備液相色譜技術(shù)從蒜頭果葉中分離得到化合物Ⅰ，由紫外光譜、紅外光譜、質(zhì)譜和核磁共振確定其化合物Ⅰ為蘆丁，高效液相色譜外標(biāo)法測得該化合物的純度達(dá)95.59％?；钚栽囼灲Y(jié)果表明:純化的葉總

7、黃酮與殘渣總黃酮對DPPH·的清除率均比純化的蘆丁化合物、單寧酸對照品和未純化的總黃酮的清除率要高。當(dāng)濃度為1000μg·mL-1時，純化葉總黃酮和渣總黃酮清除率分別為91.69％、89.78％。抗油脂氧化試驗結(jié)果表明蒜頭果葉純化總黃酮對豬油具有較好的抗氧化能力。蒜頭果葉粗提取和純化總黃酮對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌和沙門氏菌均有不同程度的抑制作用，其中對金黃色葡萄球菌抑菌圈大于12.0 mm。蒜頭果具有較強(qiáng)的抗氧化作用和抑菌能力，其活

8、性主要源于蘆丁化合物。
　　 (4)以蒜頭果殼和樹枝為原料，采用一般堿法、超聲波輔助和微波輔助提取木質(zhì)素，分別測定了蒜頭果殼和枝中木質(zhì)素含量及木質(zhì)素的提取率，并對所提取的木質(zhì)素進(jìn)行紅外和紫外光譜分析。克拉森木素定量法測得蒜頭果殼和枝中木質(zhì)素含量別為44.41(±0.65)％和34.57(±0.52)％，在堿濃度0.5 mol·L-1、堿液量30 mL·g-1、超聲波處理時間1h、水浴溫度40℃提取工藝條件下，果殼和枝木質(zhì)素提取率

9、分別為45.21(±0.59)％、63.78(±0.73)％。紫外和紅外圖譜顯示超聲波輔助法提取的木質(zhì)素保持了木質(zhì)素原有結(jié)構(gòu)，存在明顯的愈瘡木基和紫丁香基苯環(huán)結(jié)構(gòu)。并通過粘度法比較了三種不同提取方法所得到的木質(zhì)素相對分子質(zhì)量。
　　 (5)從蒜頭果的果皮果肉中提取抗氧化劑，并采用兩種體系評價其抗氧化性能。結(jié)果表明:以pH4的水為溶劑、料液比1∶30(g·mL-1)、70℃水浴1h條件下提取2次，蒜頭果皮果肉多酚抗氧化成分得率為3

10、.29％。其多酚化合物對羥基自由基(·OH)和二苯基苦基肼自由基(DPPH·)均有較強(qiáng)的清除作用，最大清除率分別為74.00％、76.54％，其中對DPPH·清除率強(qiáng)弱依次為蒜頭果皮果肉水提取物＞抗壞血酸＞單寧酸。
　　 (6)以脫脂后的蒜頭果渣為原料，測定了蒜頭果渣中蛋白質(zhì)含量。通過單因素實驗和正交試驗優(yōu)化蛋白質(zhì)提取的工藝條件。結(jié)果表明，蒜頭果渣的蛋白質(zhì)含量為31.07％，蛋白質(zhì)提取的優(yōu)化工藝條件為:提取溫度為室溫，提取溶劑為