SELDI技術(shù)分析非霍奇金淋巴瘤化療前后血清蛋白質(zhì)譜動(dòng)態(tài)變化.pdf

1、研究背景：非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)采用現(xiàn)代治療方法，完全緩解率可達(dá)70-80﹪，但5年生存率僅40﹪左右。許多獲得緩解的病人最終復(fù)發(fā)死亡。微小殘留病灶是復(fù)發(fā)的根源。尋找NHL血清特異性小分子標(biāo)志蛋白，作為微小病灶的監(jiān)測和療效判斷，有助于生存率的改善。腫瘤微小殘留病灶的檢測是科學(xué)家們一直探索的課題。上世紀(jì)八十至九十年代，采用PCR、巢式PCR、RT-PCR和熒光定量PCR等體外擴(kuò)增技術(shù)在分子水

2、平上檢測NHL微小殘留病灶方面做了大量的研究，然而結(jié)果不盡人意。近年來發(fā)展SELDI蛋白芯片技術(shù)具有快速、簡單、敏感、樣本用量極少等優(yōu)點(diǎn)，可能為提高目前微小殘留病灶檢測水平提供新的思路。 研究目的： 在NHL發(fā)病、化療后完全緩解、復(fù)發(fā)等不同階段，腫瘤細(xì)胞內(nèi)或機(jī)體內(nèi)(部分進(jìn)入外周血)在蛋白質(zhì)成分和數(shù)量上都會(huì)有相應(yīng)的改變。所以，從理論上說，通過對(duì)蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)的觀察可以篩選出NHL特異的小分子標(biāo)記物。 本研究應(yīng)用SELD

3、I蛋白芯片技術(shù)，分析NHL初診與正常人群血清蛋白質(zhì)譜的差異，以及NHL化療前后血清蛋白質(zhì)譜的變化，尋找NHL血清小分子標(biāo)記物，并探討其臨床應(yīng)用價(jià)值。 研究方法： 1、收集了2003年2月-2006年9月間在中山大學(xué)腫瘤防治中心內(nèi)科住院的初治的NHL患者共44例，男性35例，女性9例，中位年齡10歲(7月齡～56歲)。病理類型：前驅(qū)T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤/白血病(T-LBL/ALL)17例，間變大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)6例，周

4、圍T細(xì)胞淋巴瘤，非特殊型(PTCL,unspecifled)1例，前驅(qū)B淋巴母細(xì)胞淋巴瘤/白血病(B-LBL/ALL)8例，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)8例，伯基特淋巴瘤(BL)4例。所有患者在初診治療前均抽血標(biāo)本1次，接受相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化療方案化療獲得完全緩解(complete remission，CR)后再抽血標(biāo)本1次，共收集血標(biāo)本88份并-80℃冷凍保存。正常51例正常人血清蛋白質(zhì)譜為對(duì)照組。血清標(biāo)本分成3組：NHL初診組、正常對(duì)

5、照組和CR組(NHL患者自身配對(duì))。 2、采用表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析技術(shù)(surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)對(duì)結(jié)合在弱陽離子芯片CM10上的血清蛋白質(zhì)譜進(jìn)行讀取分析。 3、應(yīng)用Ciphergen ProteinChip 軟件進(jìn)行原始數(shù)據(jù)的校正和分析，以B

6、iomarker Wizard對(duì)NHL初診組與正常對(duì)照組的蛋白質(zhì)譜數(shù)據(jù)作比較和t檢驗(yàn)，尋找兩組間表達(dá)有差異的蛋白質(zhì)峰。再對(duì)NHL初診組與CR組蛋白質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行同樣的處理。以Biomarker Pattern軟件分析數(shù)據(jù)并建立分類樹模型，構(gòu)建最優(yōu)模型的差異蛋白成為候選標(biāo)記物。 研究結(jié)果： 1、我們?cè)贜HL初診患者與正常對(duì)照組血清實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，NHL患者血清中有54個(gè)差異蛋白(P<0.05)，其中8個(gè)差異蛋白在NHL患者血清中

7、高表達(dá),46個(gè)差異蛋白在NHL患者血清中低表達(dá)。 2、NHL初診與化療后CR組血清：上述8個(gè)在NHL血清高表達(dá)的差異蛋白有1個(gè)在化療CR后表達(dá)下降，46個(gè)在NHL血清低表達(dá)的差異蛋白有9個(gè)在化療CR后表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。 3、M/Z位于11710和11672的蛋白峰是同一個(gè)差異蛋白峰的不同部分，均在NHL血清組高表達(dá)，化療CR后表達(dá)下降，P<0.001，選為NHL的候選標(biāo)記物。 4、亞組分析：亞型淋巴母細(xì)胞

8、性淋巴瘤/白血病(lymphoblastic lymphoma/leukemia，LBL/ALL，以下簡稱LBL)25例(占NHL病例總數(shù)56.8﹪)，LBL初診與正常組血清：LBL初診血清中有52個(gè)差異蛋白(P<0.05)，其中8個(gè)差異蛋白在LBL初診血清中高表達(dá),44個(gè)差異蛋白在NHL初診血清中低表達(dá)。LBL初診與CR組血清：上述8個(gè)在LBL血清高表達(dá)的差異蛋白化療CR后表達(dá)無明顯下降，在LBL初診血清低表達(dá)的44個(gè)差異蛋白有9個(gè)在

9、化療CR后表達(dá)上調(diào)(P<0.05)，這9個(gè)差異蛋白的質(zhì)荷比與NHL化療CR后上調(diào)的差異蛋白完全相同。 5．Biomarker Pattern軟件從上述NHL和LBL化療CR后上調(diào)的9個(gè)血清差異蛋白中自動(dòng)選取幾個(gè)鑒別意義最大的候選標(biāo)記物建立NHL分類樹模型和LBL分類樹模型。NHL分類樹模型(M8581、M15149、M6646和M8918)可將NHL初診和正常對(duì)照的血請(qǐng)正確分組，敏感性為93.3﹪，特異性為100﹪，構(gòu)建模型的蛋

10、白峰選為NHL候選標(biāo)記物。LBL分類樹模型(M6646、M15149和M8708)可將LBL組和正常組血清正確區(qū)分，敏感性和特異性均為96﹪，構(gòu)建模型的蛋白峰選為LBL候選標(biāo)記物。 研究結(jié)論： 1．本研究發(fā)現(xiàn)非霍奇金淋巴瘤患者血清存在有6個(gè)候選標(biāo)記蛋白，它們是M11710(NHL高表達(dá))、M11672(NHL高表達(dá))、M8581(NHL低表達(dá))、M15149(NHL低表達(dá))、M6646(NHL低表達(dá))和M8918(NHL