基于SELDI-TOF-MS技術的乳腺癌血清蛋白質(zhì)譜研究.pdf

1、乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,嚴重威脅著患者的健康與生命。尋找能夠用于早期診斷、準確預后判斷以及預測治療反應的新的標志物對提高乳腺癌診斷和治療效果具有重要意義。蛋白質(zhì)組學能夠聯(lián)系并且反映癌癥基因改變以及細胞生理學變化,因此人們對使用蛋白質(zhì)分析技術尋找腫瘤蛋白標志物的工作給予了極大的希望。新近的質(zhì)譜技術研究進展,使得高通量的蛋白質(zhì)組學研究成為可能。本課題利用表面增強激光解析離子化飛行時間質(zhì)譜(SELDI-TOF-MS)技術,以乳腺癌患

2、者的血清標本為研究對象,研究乳腺癌與非癌對照的血清蛋白質(zhì)譜差異,以及乳腺癌不同診療階段血清蛋白質(zhì)譜變化特征,以期尋找乳腺癌相關候選血清蛋白標志物,為乳腺癌的診斷和療效監(jiān)測提供一定幫助。
　　 一、用SELDI-TOF-MS檢測血清蛋白質(zhì)譜
　　 目的：獲得乳腺癌病例不同病程階段的血清蛋白質(zhì)譜,為下一步差異分析打好基礎。
　　 方法收集乳腺癌不同病程階段、乳腺良性疾病病例以及正常對照者的血清標本,用表面增強激光解析

3、離子化飛行時間質(zhì)譜(SELDI-TOF-MS)結合蛋白質(zhì)芯片技術進行檢測。
　　 結果：得到原發(fā)乳腺癌的初診時血清蛋白質(zhì)譜圖117份,39例TE方案新輔助化療前后配對血清蛋白質(zhì)譜圖78份,18例未行新輔助化療的手術前后配對血清蛋白質(zhì)譜圖36份;乳腺癌復發(fā)病例血清蛋白質(zhì)譜圖20份;乳腺癌良性疾病血清蛋白質(zhì)譜圖85份;正常對照血清蛋白質(zhì)譜圖56份。
　　 結論：采用SELDI-TOF-MS技術能夠較好地檢測乳腺癌相關血清低分

4、子量蛋白質(zhì)譜。
　　 二、乳腺癌與正常對照、乳腺良性疾病血清蛋白質(zhì)譜的差異和鑒別
　　 目的：探索乳腺癌與正常對照、乳腺良性疾病血清蛋白質(zhì)譜的差異,篩選差異蛋白構建分類模型鑒別乳腺癌與非癌病例。
　　 方法將乳腺癌、正常對照和良性疾病均各自隨機分成訓練組和驗證組,分別比較乳腺癌與正常,乳腺癌與良性疾病,乳腺癌與正常及良性訓練組的血清蛋白質(zhì)譜差異,分別篩選差異蛋白構建最優(yōu)分類模型,再以驗證組病例對各分類模型的鑒別效

5、果進行盲法驗證。
　　 結果：乳腺癌與正常對照之間存在14個顯著差異蛋白峰(P＜0.05),乳腺癌與良性疾病之間存在12個顯著差異蛋白峰(P＜0.05),乳腺癌、正常和良性三組之間存在17個顯著差異蛋白峰(P＜0.05)。以m/z為4212、5902、7940、11360、4974、5384、6009、7766、8150和8518的10個差異蛋白構建分類模型,鑒別乳腺癌、正常對照和乳腺良性疾病的敏感性分別為85.14％(63/7

6、4),86.11％(31/36),88％(44/50),總準確性為86.25％(138/160),用獨立樣本進行盲法驗證,鑒別敏感性分別為79.09％(34/43),65.00％(13/20),77.14％(27/35),總準確性為75.51％(74/98)。
　　 結論：乳腺癌與正常對照、乳腺良性疾病之間存在血清蛋白質(zhì)譜差異,以m/z為4212、5902、7940、11360、4974、5384、6009、7766、8150和

7、8518的10個差異蛋白構建分類模型,可以幫助鑒別乳腺癌、正常對照與乳腺良性疾病病例。
　　 三、乳腺癌新輔助化療相關血清蛋白質(zhì)譜分析
　　 目的：研究乳腺癌紫杉醇+表柔比星(TE)方案新輔助化療不同療效前后血清蛋白質(zhì)譜變化,尋找療效預測蛋白。
　　 方法分析新輔助化療不同療效組在化療前后的血清蛋白質(zhì)譜變化;分析新輔助化療有效和無效組在化療前的蛋白質(zhì)譜差異,篩選特異蛋白,建立鑒別TE方案新輔助化療前有效組與無效組

8、病例的判別模型。
　　 結果： TE方案新輔助化療有效組經(jīng)過化療后,有7個蛋白含量顯著降低,1個蛋白含量顯著增高;無效組無顯著變化。新輔助化療有效和無效組在化療前有13個蛋白峰的含量存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05),篩選出m/z為4974、10517、6338、9282和7766的5個蛋白構建決策樹分類模型以鑒別TE方案新輔助化療前有效組與無效組病例,在訓練模式下準確率為96.23％(51/53),敏感性為97.06％(33/34

9、),特異性為94.74％(18/19);測試模式下準確率為75.47％(40/53),敏感性和特異性分別為79.41％(27/34)和68.42％(13/19)。
　　 結論：新輔助化療有效組化療前后血清蛋白質(zhì)譜存在差異;以m/z為4974、10517、6338、9282和7766的5個蛋白構建分類模型可以幫助鑒別TE方案新輔助化療前有效組與無效組病例,有助于化療療效預測。
　　 四、乳腺癌相關血清差異蛋白綜合分析

10、>　　 目的：了解乳腺癌不同病程中差異蛋白的表達特征,篩選乳腺癌候選血清標志物。
　　 方法比較乳腺癌根治性手術前后血清蛋白質(zhì)譜的變化;比較乳腺癌復發(fā)病例與正常對照之間的血清蛋白質(zhì)譜差異并構建分類模型。綜合乳腺癌與正常、乳腺良性疾病之間,有效新輔助化療及根治性手術前后,以及乳腺癌復發(fā)病例的血清蛋白的變化,分析差異蛋白的表達特征,篩選乳腺癌候選血清蛋白標志物。
　　 結果：乳腺癌根治性手術后早期,只有一個m/z為4974

11、的蛋白峰含量發(fā)生顯著變化,術后早期立即即下降。乳腺癌復發(fā)組與正常對照組有37個蛋白峰的含量存在統(tǒng)計學差異,以質(zhì)荷比為8518的差異蛋白構建分類模型即可鑒別復發(fā)病例,準確性為100％(50/50),敏感性為100％(20/20),特異性為100％(30/30)。與正常對照和乳腺良性疾病相比,m/z為4974、4288和7766的蛋白在乳腺癌中呈高表達,在手術后/有效化療后表達降低,在乳腺癌復發(fā)后又呈高表達,與乳腺癌荷瘤狀況呈正相關呈正相關