多個基因參與microRNA-107在透明細胞腎癌中發(fā)揮抑制作用.pdf

1、目的:腎癌對放化療不敏感，對于腎癌的治療目前仍以手術治療為主，由于早期缺乏敏感及特異的檢測指標，30％的患者發(fā)現(xiàn)腫瘤已經(jīng)有了轉移。因此亟待尋求一種新的基因位點作為腎癌早期篩查標記以及生物治療的靶點，研究熱門的microRNA有望成為新的研究目標。本研究選擇miR-107作為研究對象，主要通過體內(nèi)外實驗來評估m(xù)iR-107在透明細胞腎癌中的作用效果，并進一步探討其在腫瘤中發(fā)揮作用的機制。
　　材料與方法:通過qRT-PCR檢測miR

2、-107在52對透明細胞腎癌組織及對應癌旁組織中中表達水平的不同，并進一步在三種腎細胞系786-O，ACHN和HKC中驗證表達的差異性，通過轉染化學合成的模擬生物體內(nèi)源的miR-107 mimics及感染重組的過表達miR-107慢病毒質(zhì)粒來研究miR-107對透明細胞腎癌細胞的作用及其作用機制。為了明確在透明細胞腎癌中miR-107發(fā)揮作用的靶基因，在運用生物信息學預測可能的靶基因的基礎上，利用熒光素酶試驗以及Western Blot

3、等方法證實了EIF5基因是miR-107發(fā)揮作用靶基因。同時通過Western Blot、qRT-PCR等手段發(fā)現(xiàn)p53、VHL等多個基因參與miR-107在透明細胞腎癌組織中發(fā)揮抑癌作用。
　　結果:利用qRT-PCR的方法，發(fā)現(xiàn)相對于正常組織，miR-107在透明細胞腎癌組織中表達明顯下調(diào);同樣地，相對于正常腎臟上皮細胞，miR-107在透明細胞腎癌細胞系中表達是明顯下降。體外實驗中，過表達的miR-107的透明細胞腎癌細胞的

4、增殖及侵襲能力受到明顯抑制，裸鼠體內(nèi)實驗證實過表達的miR-107可以抑制腎癌腫瘤的生長。miR-107對腎癌細胞發(fā)揮抑制作用的機制探索方面，miR-107能夠誘導細胞周期阻滯在G2/M期。證實了在透明細胞腎癌中EIF5是miR-107發(fā)揮作用的靶基因，Notch2、NF1以及VEGFA是miR-107潛在的可能的靶基因，p53和VHL等基因共同參與調(diào)節(jié)miR-107表達水平。
　　結論:在多種基因參與調(diào)節(jié)下，miR-107以EI