氨甲喋呤對映體對細胞的抑制作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　 1.探討氨甲喋呤對映體((+)MTX、(-)MTX)對ECV304,A549，HepG2細胞的增殖抑制作用及誘導凋亡實驗研究。
　　 2.快速靈敏的液相色譜串聯(lián)質譜法測定氨甲喋呤對映體作用HepG2后，藥物在細胞內外液中的濃度。
　　 方法：
　　 1.采用培養(yǎng)的ECV304，HepG2，A549細胞，應用MTT比色法分析MTX對映體的活性。
　　 2.用倒置顯微鏡觀察ECV304，

2、HepG2，A549細胞的形態(tài)學變化。
　　 3.碘化丙啶(PI)單染流式細胞術檢測ECV304，HepG2，A549的細胞周期。
　　 4.熒光顯微鏡DAPI觀察A549細胞的形態(tài)學變化及凋亡。
　　 5.DNA梯度電泳檢測細胞凋亡。
　　 6.異硫氰酸熒光素/碘化丙啶(V-FITC/PI)雙染流式細胞術檢測HepG2凋亡。
　　 7.液相色譜串聯(lián)質譜法測定MTX對映體在細胞內外液中的濃度。

3、r>　　 結果：
　　 1.在0.1μmol·L-1～150μmol·L-1范圍內，(+)MTX和(-)MTX作用于ECV304，HepG2，A549細胞24、48、72h，均抑制細胞ECV304，HepG2，A549增值，但抑制強度為(+)MTX＞(-)MTX。
　　 2.倒置顯微鏡觀鏡察不同濃度(+)MTX和(-)MTX作用ECV304，HepG2，A549細胞不同時間后，出現(xiàn)細胞不同程度的形態(tài)學改變，且(+)MT

4、X作用的細胞形態(tài)學改變強于(-)MTX。
　　 3.(+)MTX和(-)MTX作用ECV304，HepG2和A549細胞，PI單染流式細胞術檢測ECV304，HepG2，A549細胞周期的影響，表明氨甲喋呤對映體均干擾ECV304，HepG2，A549細胞DNA合成且出現(xiàn)不同程度的凋亡峰。
　　 4.熒光顯微鏡DAPI染色察不同濃度(+)MTX和(-)MTX作用A549細胞不同時間后，出現(xiàn)細胞不同程度的形態(tài)學改變，有凋亡

5、小體產生。
　　 5.DNA梯度電泳檢測結果發(fā)現(xiàn)MTX作用組有凋亡條帶出現(xiàn)，其中(+)MTX最為明顯。
　　 6.(+)MTX和(-)MTX作用HepG2細胞后，細胞出現(xiàn)不同程度的凋亡。
　　 7.(+)MTX和(-)MTX作用HepG2細胞后，測得(+)MTX在細胞內濃度高于(-)MTX。
　　 結論：
　　 (+)MTX和(-)MTX作用ECV304，HepG2，A549細胞后，能夠誘導細胞凋