胃上皮內瘤變患者胃黏膜微生態(tài)的研究.pdf

1、背景:胃癌是全球第三位癌癥相關死亡原因。慢性幽門螺桿菌(H.pylori)感染，是目前已知的與胃癌發(fā)生相關的最重要因素。H.pylori在胃癌發(fā)病機制中的作用已有部分研究。但是，胃內還有大量的非H.pylori微生物，其與胃部疾病關系的研究極少。目前尚缺乏胃癌前病變，尤其是胃上皮內瘤變(Gastricintraepithelial neoplasias，GIN)患者胃黏膜微生態(tài)的相關數據。本研究通過利用細菌16S rDNA高通量測序分析

2、技術，對胃上皮內瘤變患者胃內微生態(tài)進行分析，初步構建胃癌前病變相關胃黏膜微生態(tài)構成情況，嘗試篩選出與疾病顯著相關的菌屬。
　　方法:胃上皮內瘤變組（GIN組）納入胃鏡下診斷并經病理學證實，未接受任何治療的GIN患者;健康對照組（HC組）納入同時期無消化系統(tǒng)癥狀、H.pylori常規(guī)臨床檢測陰性，且胃鏡檢查正常的健康志愿者。分別采集GIN患者病變組織、正常胃竇和胃體部位黏膜活檢樣本各1塊;健康志愿者正常胃竇和胃體黏膜各1塊。提取胃黏

3、膜細菌總DNA，擴增16S rRNA基因V4區(qū)。利用Illumina Miseq高通量測序平臺進行雙末端測序。用QIIME等軟件進行操作分類單元(Operational taxonomic units，OTUs)聚類、分析、物種注釋;通過繪制稀釋曲線、 Chaol曲線、 Shannon指數和Rank abundance曲線進行樣品復雜度分析;通過主坐標分析(Principal coordinate analysis，PCoA)和UPGM

4、A(Unweighted pair group method with arithmetic mean)聚類分析進行健康人群、 GIN患者胃內細菌群落結構和多樣性的比較分析等生物信息學處理。同時，根據H.pylori相對豐度將兩組分別分為低、中、高三個豐度組進行分層分析。
　　結果: GIN組(n=25)的平均OTUs數目明顯低于HC組(n=30)(P＜0.05)，而低級別上皮內瘤變(n=10)和高級別上皮內瘤變(n=15)亞組間

5、的平均OTUs數目無顯著差異(P＞0.05)。在門分類水平，GIN組的厚壁菌門、擬桿菌門、放線菌門、梭桿菌門中位相對豐度明顯高于健康對照組;同時，GIN組的變形菌門、藍菌門、酸桿菌門、浮霉菌門、螺旋菌門等的中位相對豐度明顯低于健康對照組。在屬分類水平，螺桿菌屬相對豐度在兩組間無差異(P＞0.05)。GIN組的鏈球菌屬、普雷沃氏菌屬、奈瑟氏菌屬、鹽單胞菌屬、羅氏菌屬、韋榮氏菌屬、乳桿菌屬、嗜血菌屬等的相對豐度顯著高于健康組; GIN組的不

6、動桿菌屬、動膠菌屬、鞘脂菌屬等的相對豐度顯著低于對照組。不同H.pylori相對豐度分層分析顯示:H.pylori相對豐度越高，HC組和GIN組的菌群物種多樣性越低。在門水平，低、中、高組GIN患者的相對豐度均較高的是厚壁菌門，較低的是浮霉菌門、螺旋菌門等。屬水平，三組GIN患者的相對豐度均較高的是乳桿菌屬等，較低的是動膠菌屬、鞘脂菌屬、氫噬胞菌屬等。PCoA、UPGMA聚類分析顯示:健康人群和GIN患者菌群結構存在顯著差異，組間聚類明