基于細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的黃芩苷銅抗Hepg-2增殖的免疫印跡分析.pdf

1、本文比較了黃芩苷和黃芩苷銅對人肝癌細(xì)胞(HepG-2)裸鼠移植瘤生長的影響，并采用免疫印跡分析癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)以研究黃芩苷銅對人肝癌細(xì)胞株HepG-2增殖、凋亡的影響，初步探討其作用機(jī)制。
　　構(gòu)建HepG-2細(xì)胞裸鼠異種移植瘤模型，分析黃芩苷銅對人肝癌細(xì)胞裸鼠移植瘤的抑制作用。將裸鼠隨機(jī)分為4組:對照組、50mg/kg黃芩苷組、50mg/kg黃芩苷銅組、100mg/kg黃芩苷銅組。各組每天肌肉注射給藥相應(yīng)劑量并測量繪制腫

2、瘤的生長曲線，32天后處死動(dòng)物，稱重瘤塊和計(jì)算抑瘤率以評價(jià)黃芩苷銅和黃芩苷處理對HepG-2細(xì)胞裸鼠異種移植瘤的影響。利用MTT法分析黃芩苷銅對于HepG-2細(xì)胞增殖的抑制作用。采用AO染色及熒光顯微鏡觀察經(jīng)黃芩苷銅作用后，人肝癌HepG-2細(xì)胞中凋亡肝癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。利用流式細(xì)胞儀檢測肝癌細(xì)胞凋亡率。采用PI單染流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的分布，觀察黃芩苷銅對HepG-2細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用;采用Western blot分析黃芩苷銅對P

3、I3K/Akt/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白、caspase-3、Bax、p38、和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。
　　肌肉注射黃芩苷和黃芩苷銅32天后，黃芩苷劑量為50mg/kg、黃芩苷銅劑量為50mg/kg和100mg/kg時(shí)，瘤塊重量分別為0.69±0.11g，0.6±0.17g和0.40±0.07g均明顯低于對照組(P＜0.05);對HepG-2裸鼠異種移植瘤的抑制率分別為31.7％、44.9％和65.5％。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給

4、予不同濃度的黃芩苷銅HepG-2細(xì)胞48h后，黃芩苷銅可以明顯抑制HepG-2細(xì)胞的增殖，且呈劑量依賴性。使用AO染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，黃芩苷銅作用肝癌細(xì)胞后，細(xì)胞中出現(xiàn)細(xì)胞核固縮、核裂解、染色質(zhì)聚集等細(xì)胞形態(tài)改變。AnnexinⅤ/PI雙染流式結(jié)果表明黃芩苷銅作用HepG-2細(xì)胞后，黃芩苷組的細(xì)胞凋亡率和對照組的比較有顯著性的升高，表明黃芩苷銅可以誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞凋亡。流式細(xì)胞分析細(xì)胞周期結(jié)果顯示，黃芩苷銅可將肝癌的細(xì)胞周期阻滯

5、在G2/M期，同時(shí)G0/G1期細(xì)胞減少，G2/M期的細(xì)胞增多，但S期細(xì)胞無明顯變化。Western blot分析細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明黃芩苷銅能下調(diào)p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的表達(dá)、下調(diào)casepase、p38、抑制凋亡因子Bcl-2表達(dá)的下調(diào)并上調(diào)Bax蛋白表達(dá)。
　　荷瘤實(shí)驗(yàn)表明，黃芩苷銅可抑制HepG-2細(xì)胞裸鼠異種移植瘤的生長。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，黃芩苷銅能抑制HepG-2細(xì)胞的增殖，