香芹酚對肝癌HepG-2細胞增殖與凋亡的作用及其機制研究.pdf

1、從中草藥、植物中尋找有效且毒副反應小的抗腫瘤藥物儼然已成為新世紀國內外學者研發(fā)抗癌藥物的新方向。香芹酚已證實具有多方面的藥理作用，且對人的正常細胞毒性較小。已有多項實驗研究表明香芹酚能抑制多種腫瘤細胞的生長，但對人肝細胞肝癌的抑制作用及其機制尚未見報道。
　　目的：
　　研究香芹酚對肝癌HepG-2細胞增殖及凋亡的影響，并初步探討其可能的分子機制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)肝癌HepG-2細胞及肝細胞LO-2，分

2、別以不同濃度的香芹酚作用24h，MTT法檢測香芹酚的的抗增殖效應，Hoechst33258染色法及流式細胞術分析香芹酚誘導肝癌 HepG-2細胞凋亡作用，Western Blot法分析香芹酚對肝癌HepG-2細胞凋亡相關蛋白Bcl-2、caspase-3及PARP表達的影響以及MAPK家族蛋白的各種磷酸化形式。最后，分別使用P38MAPK信號通路特異性阻斷劑SB203580阻斷P38MAPK信號通路和ERK/MAPK信號通路特異性阻斷劑

3、U0216阻斷ERKMAPK信號，通過MTT法及Hoechst33258染色法檢測其阻斷后肝癌HepG-2細胞的增殖及凋亡變化。
　　結果：
　　香芹酚對人肝癌HepG-2細胞的抗增殖效應表現(xiàn)出劑量依賴性，隨著香芹酚濃度的增加，細胞存活率逐漸下降，香芹酚對肝癌HepG-2細胞24h作用時的IC50濃度為0.32 mM，而同樣條件下香芹酚對肝細胞 LO-2細胞表現(xiàn)出低毒性。Hoechst33258核染色及流式細胞術的結果顯示香

4、芹酚誘導了肝癌HepG-2細胞的凋亡，Hoechst33258核染色的結果顯示隨著香芹酚濃度的增加(0、0.05、0.1、0.2、0.4 mM)，HepG-2細胞呈現(xiàn)出明顯的凋亡形態(tài)改變；流式細胞儀檢測的細胞凋亡比率明顯升高，隨著濃度的升高其凋亡率依次為：3.70±0.22％、13.50±1.59%、25.80±2.18%、30.50±0.25%、50.60±3.81%。Western Blot結果發(fā)現(xiàn)香芹酚處理肝癌HepG-2細胞24

5、 h后，Bcl-2蛋白的表達明顯減弱，且呈濃度依賴性；當香芹酚濃度在0.2 mM以上時出現(xiàn)caspase-3的激活及cleaved PARP片斷，亦呈濃度依賴性，說明香芹酚誘導肝癌HepG-2細胞凋亡與線粒體途徑相關。予以相同濃度的香芹酚處理肝癌HepG-2細胞15 min后，Western Blot結果發(fā)現(xiàn)磷酸化ERKMAPK蛋白的表達逐漸下降；磷酸化P38 MAPK亦被激活，但其蛋白表達隨濃度變化無明顯趨勢；而JNK磷酸化未被激活。

6、在阻斷ERKMAPK信號轉導通路后，香芹酚對肝癌HepG-2細胞抗增殖效應增強而誘導凋亡效應無變化；阻斷p38MAPK信號轉導通路后，香芹酚對肝癌HepG-2細胞誘導凋亡作用減弱，同時抗增殖效應減弱。
　　結論：
　　1.香芹酚具有以劑量依賴性方式抗肝癌HepG-2細胞的效應；
　　2.抗肝癌HepG-2細胞的效應是通過抑制增殖及誘導凋亡；
　　3.抑制增殖及誘導凋亡可能與MAPK信號通路相關：其中ERKMAPK