絞股藍(lán)皂苷對HepG2細(xì)胞的凋亡、轉(zhuǎn)移侵襲的影響.pdf

1、近年來，人們致力于尋求抑制腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移侵襲的新天然藥物，皂苷類化合物在植物界分布廣泛，并且具有良好的抗腫瘤作用，不但能抑制癌細(xì)胞增殖，還能增強免疫力、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等。絞股藍(lán)屬于藥食同源性植物，從中提取分離得到的皂苷是其主要的活性成分，目前對絞股藍(lán)總皂苷的抗腫瘤作用研究的較多，而對于單體絞股藍(lán)皂苷的抗腫瘤作用研究的相對較少，分子機制尚不清楚。本課題采用不同實驗方法對絞股藍(lán)皂苷中的三種單體化合物N-2、J-0-1、J-D-40的誘導(dǎo)癌

2、細(xì)胞凋亡、抑制轉(zhuǎn)移侵襲機制進(jìn)行了研究。
　　本實驗以人肝癌HepG2細(xì)胞為實驗?zāi)Ｐ?，通過MTT法檢測樣品對HepG2細(xì)胞的抑制作用;電子掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài);DAPI染色觀察細(xì)胞核形態(tài)變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期變化，以及AnnexinⅤ-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)法分析檢測細(xì)胞凋亡;Rh-123染色分析檢測細(xì)胞線粒體跨膜電位的變化;用劃痕實驗、Transwell小室實驗分別檢測細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵襲能力;RT-PCR檢測p53、M

3、MP-2、MMP-9、HIF-1α的mRNA表達(dá);Western-blotting檢測p53、MMP-2、MMP-9、HIF-1α蛋白表達(dá)。
　　實驗結(jié)果表明，絞股藍(lán)皂苷N-2、J-0-1、J-D-40具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制轉(zhuǎn)移侵襲的能力。樣品抑制HepG2細(xì)胞的增殖，且抑制作用呈濃度依賴性;人參皂苷Rg3200μmol/L,絞股藍(lán)皂苷N-2200μmol/L、J-0-1100μmol/L、J-D-4050μmol/L作用于Hep

4、G2細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡現(xiàn)象明顯，凋亡細(xì)胞數(shù)增加，線粒體跨膜電位降低，細(xì)胞粘附性降低，細(xì)胞遷移速率減弱，穿膜細(xì)胞數(shù)減少，p53、MMP-2、MMP-9 mRNA表達(dá)降低，p53、MMP-2、MMP-9蛋白水平表達(dá)明顯降低;HIF-1α基因與缺氧對照組相比，mRNA的表達(dá)明顯降低，蛋白水平表達(dá)也明顯降低。因此絞股藍(lán)皂苷N-2、J-0-1、J-D-40可以下調(diào)肝癌HepG2細(xì)胞中p53、MMP-2、MMP-9、HIF-1α的表達(dá)，來達(dá)到抑制肝癌