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文檔簡介
1、近年來,人們致力于尋求抑制腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移侵襲的新天然藥物,皂苷類化合物在植物界分布廣泛,并且具有良好的抗腫瘤作用,不但能抑制癌細胞增殖,還能增強免疫力、抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移等。絞股藍屬于藥食同源性植物,從中提取分離得到的皂苷是其主要的活性成分,目前對絞股藍總皂苷的抗腫瘤作用研究的較多,而對于單體絞股藍皂苷的抗腫瘤作用研究的相對較少,分子機制尚不清楚。本課題采用不同實驗方法對絞股藍皂苷中的三種單體化合物N-2、J-0-1、J-D-40的誘導癌
2、細胞凋亡、抑制轉(zhuǎn)移侵襲機制進行了研究。
本實驗以人肝癌HepG2細胞為實驗模型,通過MTT法檢測樣品對HepG2細胞的抑制作用;電子掃描電鏡觀察細胞形態(tài);DAPI染色觀察細胞核形態(tài)變化;流式細胞術(shù)檢測細胞周期變化,以及AnnexinⅤ-FITC/PI雙標記流式細胞術(shù)法分析檢測細胞凋亡;Rh-123染色分析檢測細胞線粒體跨膜電位的變化;用劃痕實驗、Transwell小室實驗分別檢測細胞的轉(zhuǎn)移、侵襲能力;RT-PCR檢測p53、M
3、MP-2、MMP-9、HIF-1α的mRNA表達;Western-blotting檢測p53、MMP-2、MMP-9、HIF-1α蛋白表達。
實驗結(jié)果表明,絞股藍皂苷N-2、J-0-1、J-D-40具有誘導細胞凋亡、抑制轉(zhuǎn)移侵襲的能力。樣品抑制HepG2細胞的增殖,且抑制作用呈濃度依賴性;人參皂苷Rg3200μmol/L,絞股藍皂苷N-2200μmol/L、J-0-1100μmol/L、J-D-4050μmol/L作用于Hep
4、G2細胞后,細胞凋亡現(xiàn)象明顯,凋亡細胞數(shù)增加,線粒體跨膜電位降低,細胞粘附性降低,細胞遷移速率減弱,穿膜細胞數(shù)減少,p53、MMP-2、MMP-9 mRNA表達降低,p53、MMP-2、MMP-9蛋白水平表達明顯降低;HIF-1α基因與缺氧對照組相比,mRNA的表達明顯降低,蛋白水平表達也明顯降低。因此絞股藍皂苷N-2、J-0-1、J-D-40可以下調(diào)肝癌HepG2細胞中p53、MMP-2、MMP-9、HIF-1α的表達,來達到抑制肝癌
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