大鼠妊娠期胰島的變化節(jié)律及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的： 1、探討大鼠妊娠期胰島的變化節(jié)律。 2、研究大鼠妊娠不同階段胰島的基因表達(dá)譜，比較胰島在妊娠期的基因表達(dá)差異，并重點分析胰島再生相關(guān)基因的表達(dá)特點。 方法： 1、采用口服糖耐量試驗(OGTT)及胰島素釋放試驗(IRT)，并通過ELISA法測定血中胰島素濃度，檢測大鼠妊娠期糖耐量及胰島素釋放的變化。 2、以胰島分離純化技術(shù)獲得SD大鼠孕10.5天、12.5天、14.5天、18.5天、20.5

2、天及正常成年雌鼠的胰島。 3、采用葡萄糖刺激下的胰島素分泌試驗(GSIS)，并通過放射免疫法檢測上清中胰島素含量。 4、運(yùn)用5-溴尿脫氧嘧啶核苷(BrdU)及抗胰島素抗體免疫組化雙染法進(jìn)行形態(tài)學(xué)及量化分析，了解大鼠妊娠期胰島β細(xì)胞的增殖節(jié)律。 5、利用Affymetrix公司生產(chǎn)的高密度寡核苷酸芯片檢測大鼠妊娠各階段胰島的基因表達(dá)譜；用生物信息學(xué)技術(shù)，分析妊娠各時期芯片結(jié)果，尤其是胰島再生相關(guān)基因的表達(dá)特點。

3、 6、運(yùn)用RT-PCR及Real-time PCR對芯片結(jié)果進(jìn)行驗證，重點確定胰島再生相關(guān)基因的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1、與正常對照組相比，大鼠妊娠期OGTT各時點均表現(xiàn)出血糖減低的趨勢，不僅空腹血糖低于正常大鼠，葡萄糖負(fù)荷后各時段的血糖亦低于正常對照。該變化從孕12.5天開始出現(xiàn)，孕14.5天顯著減低，孕18.5天達(dá)到低谷，孕20.5天仍低于正常對照組。葡萄糖曲線下面積的變化與OGTT曲線相同。與大鼠妊娠期糖耐量的變

4、化相仿，大鼠的空腹胰島素水平從孕12.5天開始顯著低于正常水平，并一直持續(xù)到孕20.5天。葡萄糖負(fù)荷后則表現(xiàn)出與空腹胰島素相反的變化趨勢：葡萄糖負(fù)荷后各時段的胰島素從孕14.5天開始顯著高于正常大鼠，該變化一直持續(xù)至孕20.5天。胰島素曲線下面積與葡萄糖負(fù)荷后胰島素的變化趨勢基本一致。 2、大鼠妊娠期葡萄糖刺激下胰島素分泌能力亦有著特殊的變化，從孕12.5天開始顯著增強(qiáng)，孕18.5天達(dá)到高峰，孕20.5天下降至對照組水平。

5、 3、與正常對照組相比，大鼠妊娠12.5天時胰島β細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)、胰島素染色陽性區(qū)域平均光密度以及胰島素相對濃度(IRC)均明顯增高，并于孕14.5天到達(dá)高峰，而后逐漸下降至對照組水平。胰島素陽性表達(dá)細(xì)胞密度(PCD)在孕12.5天及孕14.5天時較正常組顯著增高。此外，大鼠妊娠14.5天至20.5天時胰島素陽性表達(dá)細(xì)胞面積亦明顯高于正常水平。 4、Affymetrix Rat Genome 230 2.0芯片共包含31

6、099個基因，正常(N)、孕10.5天(P10.5)、孕14.5天(P14.5)等時期大鼠基因的檢出率分別為45.3％、38.2％、37.2％。對芯片結(jié)果進(jìn)行功能分類，發(fā)現(xiàn)上調(diào)及下調(diào)基因的功能大多數(shù)集中在：(1)凋亡或腫瘤相關(guān)；(2)連接蛋白；(3)代謝相關(guān)；(4)細(xì)胞周期；(5)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；(6)結(jié)構(gòu)分子；(7)轉(zhuǎn)錄調(diào)控；(8)物質(zhì)運(yùn)輸這8類中。 5、對胰島激素相關(guān)基因，胰島素釋放相關(guān)基因及胰島再生相關(guān)基因等進(jìn)行了詳細(xì)分析，發(fā)

7、現(xiàn)胰島素基因(Insulin1，Insulin2)在孕期特異性表達(dá)增加。鉀離子通道基因(Kir6.2)，Rab3a，葡萄糖激酶基因(Gck)，以及B細(xì)胞易位基因(BTG2)在孕期也有特異的改變。此外，再生基因家族成員(Reg3a)在孕期的表達(dá)明顯高于正常大鼠。 結(jié)論： 1、大鼠妊娠期胰島的功能和增殖能力與非妊娠鼠相比發(fā)生了明顯改變，且在孕中晚期變化最為顯著。 2、與正常對照組相比，大鼠妊娠期數(shù)百條基因發(fā)生了差異表