孕期糖代謝異常大鼠模型的建立及對子代糖代謝的影響.pdf

1、本實驗應用STZ建立類似于人類孕期糖代謝異常的大鼠模型，為進一步研究探討與胰島素抵抗和分泌缺陷有關的妊娠期糖代謝異常的發(fā)病機制，尋找孕期有效的干預及治療方法提供理論依據(jù)，同時在此基礎上研究孕期糖代謝異常對子鼠的近期生長和遠期健康的影響，為成人疾病早期預防提供基礎資料。 材料和方法: 1、實驗材料 (1)實驗動物：健康Wistar大鼠共54只，其中雌性36只，體重230～270g；雄性18只，體重360～400g，

2、購于中國醫(yī)科大學動物中心。 (2)主要試劑：STZ、檸檬酸緩沖液、血糖檢測試劑、胰島素放射免疫試劑盒等。 (3)主要儀器：血糖儀、血糖試紙條、動物秤、722可見光分光度計、普通離心機、電子天平、深凍(-70℃)冰箱等。 2、實驗方法: (1)孕期糖代謝異常大鼠模型的建立將36只’Wistar雌性大鼠適應性喂養(yǎng)一周后與18只雄鼠2：1合籠，次日清晨陰道涂片，生物顯微鏡鏡下精子陽性定為孕第一天，懷孕雌鼠單籠

3、喂養(yǎng)。未受孕雌鼠繼續(xù)與雄鼠合籠。合籠兩周未孕的大鼠放棄。懷孕大鼠隨機分為兩組：STZ組24只，對照組大鼠7只。兩組孕鼠妊娠第五天，STZ組于禁食12h后腹腔一次性注射新配制的2％STZ溶液，劑量為40mg/kg體重；對照組同等條件下腹腔注射檸檬酸緩沖液。兩組母鼠在孕第13、16、19天，分別尾尖剪斷取血，測其空腹血糖濃度。STZ組如果三次血糖值有一次高于5.5mmol/L即為實驗組，三次血糖均沒有高于5.5mmol/L的排除本次實驗研究

4、。母鼠孕期每三天稱一次體重，記錄母鼠的進食量和進水量：懷孕大鼠所產(chǎn)仔鼠在12小時內(nèi)稱重。仔鼠的出生體重低于對照組的平均體重減去兩個標準差為宮內(nèi)發(fā)育遲緩。仔鼠從出生到6周每三天稱重一次，6周后每周稱一次體重。3周識性別，4周斷乳，4周后雌雄分開，2～3只一籠。喂養(yǎng)至12周。 (2)樣本采集與處理實驗組和對照組仔鼠分別在生后6周、12周時，經(jīng)禁食12小時后，乙醚麻醉，剖開腹腔，下腔靜脈取血5～10ml左右，采集的血樣在室溫靜置2小時

5、后，以3000r/min離心20分鐘，分離血清，同時取肝、腎、脾臟、胰腺稱重并記錄，將血清密封于-70℃冰箱中保存，待測。 (3)指標的檢測方法空腹血糖(fasting blood sugar，F(xiàn)BS)測定：鄰甲苯胺法。 空腹胰島素(fasting insulin，F(xiàn)INS)測定：采用放射免疫分析方法，按胰島素放免分析試劑盒中的使用說明進行操作。 (4)IR判定標準穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=FIN

6、S×FBS/22.5，反映胰島素抵抗。數(shù)值越大表明外周組織對胰島素越不敏感，胰島素抵抗越強。 3、統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，結果以均數(shù)±標準差(x士s)表示，HOMA-IR值取其自然對數(shù)使之正態(tài)化后行t檢驗，組間均數(shù)比較采用t檢驗和方差分析，率的比較用x<'2>檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。 結果: 1、孕期糖代謝異常大鼠模型建立在24只STZ注射孕鼠中，有12只為高血糖大鼠(實驗

7、組)，其余12只孕鼠表現(xiàn)為正常血糖水平(放棄)。12只實驗組大鼠有2只鼠分別在孕17天和孕21天死亡。順利生下仔鼠的有10只。因此，本實驗孕期糖代謝異常大鼠模型的成功率為42％左右。 (1)兩組孕鼠孕期進食量實驗組母鼠在孕12天前與對照組比較，進食量無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，從孕15天起到分娩前實驗組進食量明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (2)兩組孕鼠孕期進水量實驗組母鼠從孕第9天起到分娩時，進水量

8、明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (3)兩組孕鼠孕期體重變化孕第6天開始到孕第20天，實驗組母鼠體重一直低于對照組(P>0.05)；孕第20天時實驗組母鼠體重明顯低于對照組，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (4)兩組孕鼠孕期排尿情況通過肉眼觀察，從孕8天開始，實驗組孕鼠籠中的墊料幾乎每天都是全濕的，兩天就需換一次墊料；而對照組孕鼠籠中的墊料三四天都保持干爽，可以推斷出實驗組排尿量高于對照組。 (

9、5)兩組孕鼠孕期血糖水平孕13、16、19天，實驗組孕鼠血糖明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學意義(P<0．05)，并且實驗組母鼠隨孕期增加血糖水平有明顯增高現(xiàn)象。 2、仔鼠出生后的生存狀況及與糖代謝情況 (1)兩組仔鼠出生死胎率與宮內(nèi)發(fā)育遲緩率比較實驗組死胎率高于對照組，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；實驗組宮內(nèi)發(fā)育遲緩的發(fā)生率顯著高于對照組，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (2)兩組仔鼠體重變化的比較實驗組仔鼠從出

10、生開始到第12周，體重明顯低于對照組，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (3)兩組仔鼠6周和12周時臟器與體重的比兩組仔鼠6周時，肝臟/體重、腎臟/體重、脾/體重和胰腺/體重之間無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；12周時，實驗組脾臟/體重明顯高于對照組(P<0.05)，其它臟器與體重比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 3、兩組仔鼠6周和12周時FBS、FINS和HOMA．IR水平比較仔鼠出生6周時，實驗組FBS、FINS和HO