地塞米松對弓形蟲RH株增殖及宿主與弓形蟲多不飽和脂肪酸代謝的影響.pdf

1、研究背景及目的：
　　剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）是一種頂復(fù)門專性細胞內(nèi)寄生蟲，可以導(dǎo)致人等哺乳類動物，甚至鳥類感染，引起弓形蟲病。大部分人在感染弓形蟲后通常處于無癥狀的隱性感染階段，一旦機體免疫力受損，體內(nèi)休眠期的弓形蟲將快速增殖引起嚴重的弓形蟲病，尤其是在患有艾滋病，使用免疫抑制劑后或器官移植病人中更加嚴重。臨床上，患者長期應(yīng)用皮質(zhì)醇激素極易引發(fā)急性弓形蟲病，研究表明外源性糖皮質(zhì)激素增加會增強動物對多種病原

2、體易感性。地塞米松作為一種糖皮質(zhì)激素在臨床上廣泛應(yīng)用，它不僅具有抗炎、抗休克等作用，同時還會影響脂肪酸代謝。有研究表明地塞米松對大鼠巨噬細胞中的弓形蟲有一定增殖作用，但其作用機制不清楚。多不飽和脂肪酸不光是生物體細胞膜的重要組成部分，同時還參與細胞代謝信號傳導(dǎo)過程，本文研究多不飽和脂肪酸代謝在地塞米松對弓形蟲RH株增殖中的作用。
　　方法:
　　1.用四甲基偶氮唑藍（MTT）法檢測地塞米松對弓形蟲增殖作用。
　　2.吉

3、氏染色觀察細胞內(nèi)弓形蟲增殖率，侵襲率。
　　3.細胞計數(shù)法計數(shù)地塞米松對弓形蟲的增殖作用。
　　4.氣相色譜分析地塞米松對弓形蟲RH株，人乳腺癌231細胞多不飽和脂肪酸代謝的影響。
　　結(jié)果：
　　1.MTT法檢測顯示地塞米松能促進弓形蟲增殖并呈濃度依賴性。地塞米松作用弓形蟲后，24h時實驗組和對照組相比差異不明顯。但地塞米松作用弓形蟲48h后增殖作用明顯，10-7,10-6,10-5,10-4mg/ml不同濃度

4、地塞米松作用72h后實驗組 OD值分別為0.4570±0.017,0.5545±0.023,0.6024±0.035,0.6535±0.046,而對照組為0.3505±0.012，實驗組OD值高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。
　　2.10-4mg/ml地塞米松作用弓形蟲不同時間后，吉氏染色，1000倍顯微鏡下觀察，處理組細胞內(nèi)假包囊體積明顯大于對照組。計數(shù)實驗組地塞米松作用24h,48h,60h,72h后每100個

5、231細胞中有65±1,88±2,99±1,100±0個細胞感染弓形蟲，而對照組為51±3,68±2,83±2,92.3±2。實驗組感染率明顯高于對照組，差異均有有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。計數(shù)地塞米松實驗組48h,60h,72h后100個細胞內(nèi)弓形蟲數(shù)量分別為497±5,1071±21,4847±115高于對照組(269±7,573±11,1057±42)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。
　　3.細胞計數(shù)法顯示，10-

6、4mg/mlDXM作用48h后對照組和實驗組之間細胞外弓形蟲數(shù)量有明顯差異(P＜0.01).10-4mg/ml DXM作用48h,72h,96h后細胞外弓形蟲數(shù)量分別為(18±5,119±16,154±29)×104個/ml，而對照組為(17±5,65±10,69±10)×104個/ml。
　　4.氣相色譜分析發(fā)現(xiàn)弓形蟲脂肪酸多為長鏈不飽和脂肪酸，主要有以下幾種組成：c16:0、c18:0、c18:1、c18:2、c18:3、c2

7、0:0、c20:1、c20:2、c20:4、c22:1、c22:2,其中大部分為多不飽和脂肪酸。氣相色譜分析發(fā)現(xiàn)實驗組弓形蟲和231細胞 c18:1油酸含量明顯升高；感染弓形蟲的231細胞多不飽和脂肪酸含量明顯高于未感染弓形蟲的231細胞，而地塞米松作用后感染弓形蟲的231細胞多不飽和脂肪酸量與未感染弓形蟲的231細胞相近。
　　結(jié)論：
　　1.地塞米松對弓形蟲有明顯的增殖作用，呈濃度依賴型。
　　2.地塞米松能影響弓