大黃魚仔稚魚消化生理、蛋白質(zhì)和蛋氨酸需要量的研究.pdf

1、本文通過一系列飼養(yǎng)實驗對大黃魚仔稚魚消化生理、蛋白質(zhì)和蛋氨酸需要量進(jìn)行了初步而系統(tǒng)的研究。主要研究成果包括：研究了大黃魚仔稚魚胃、腸道、肝臟和胰腺發(fā)育的顯微和超微結(jié)構(gòu)及胃蛋白酶活力；研究了微顆粒飼料與冷藏橈足類對大黃魚仔稚魚主要消化酶活力、腸道和肝臟顯微結(jié)構(gòu)的影響；研究了飼料中不同蛋白和淀粉水平對大黃魚仔稚魚生長、成活率及胰淀粉酶和蛋白酶活力的影響；定性評估了大黃魚仔稚魚氨基酸的需要量；確定了大黃魚仔稚魚對L-蛋氨酸的適宜需要量。本研究

2、不僅填補(bǔ)了大黃魚仔稚魚營養(yǎng)生理研究的空白，而且在海水仔稚魚營養(yǎng)研究上有重要學(xué)術(shù)價值，并為大黃魚育苗生產(chǎn)和微顆粒飼料的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。 本文首先對近年來海水仔稚魚的消化生理和營養(yǎng)需要量的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。然后通過一系列飼養(yǎng)實驗對大黃魚仔稚魚消化生理、蛋白質(zhì)和蛋氨酸需要量進(jìn)行了研究。 作者研究了0～40日齡大黃魚仔稚魚胃、腸道、肝臟和胰腺發(fā)育的顯微、超微結(jié)構(gòu)及胃蛋白酶活力。結(jié)果顯示，水溫24±1℃時，大黃魚仔魚4日齡起由

3、消化管前端膨大形成胃的雛形，此時胃的結(jié)構(gòu)與食道相似，但無杯狀細(xì)胞。13日齡時胃延長并在后段發(fā)生彎曲，開始分化出賁門、胃體和幽門3部分。胃粘膜形成褶皺，由短的單層纖毛柱狀上皮組成，微絨毛不規(guī)則、短而稀少，線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較多，主要分布在細(xì)胞頂端，核在細(xì)胞基部，缺少杯狀細(xì)胞。直到21日齡，才觀察到胃腺，呈腺泡狀結(jié)構(gòu)沿賁門胃和胃底粘膜分布，其數(shù)量在胃底部增多，但在賁門部減少，而在幽門部未見到胃腺。腺細(xì)胞是典型的泌酸細(xì)胞，內(nèi)有大量的位于基部的

4、線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器。此時胃呈“Y”型，胃粘膜下層是結(jié)締組織，向外為肌肉層和漿膜層。結(jié)締組織層中可見色素顆粒，但分布不均。隨著魚苗的生長，色素層變厚并沿整個胃壁分布。直到25日齡時才檢測到胃蛋白酶活力，30日齡時活力顯著升高，之后略有下降。胃蛋白酶的存在表明功能性胃的發(fā)育和酸性消化的開始。由此推測大黃魚苗25日齡左右可使用配合飼料代替生物餌料。 剛孵出時，大黃魚仔魚腸道原基出現(xiàn)，呈直管狀，緊靠卵黃囊背方，粘膜由單層柱狀上皮

5、細(xì)胞構(gòu)成，內(nèi)有許多線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。3日齡時，腸后段彎曲90。，腸粘膜收縮變?yōu)榘昴?，將腸段分為前腸和中腸，兩者的組織學(xué)結(jié)構(gòu)相同，細(xì)胞游離面伸出一薄層微絨毛，核位于基部、呈卵圓形。中腸后為直腸，由立方上皮組成，但未形成褶皺和杯狀細(xì)胞。5日齡時，腸道前端膨大，中部形成一個盤繞。前中腸粘膜開始形成褶皺，線粒體大，和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)主要分布于頂端，微絨毛長而密集，核仁明顯。后腸上皮細(xì)胞的游離面可見行使胞飲作用的囊泡，線粒體較少，微絨毛短而稀少、不規(guī)

6、則。7日齡時，直腸上皮可見亞核液泡，其數(shù)量隨魚苗的生長而增多，表明胞飲作用活躍。此時前腸可見杯狀細(xì)胞，9曰齡后出現(xiàn)在中腸。15日齡時幽門盲囊出現(xiàn)，呈指狀，結(jié)構(gòu)與前腸相似，其數(shù)量在35日齡之前一直增加。幽門盲囊的出現(xiàn)標(biāo)志著腸道具有幼魚的特征。3日齡仔魚肝細(xì)胞均質(zhì)，線粒體大，核為卵圓形，核仁不明顯，胞內(nèi)無脂滴。5日齡仔魚肝臟分化成左右兩片小葉，右半小葉比左半小葉長且大，并向后延伸。隨著外源性營養(yǎng)的開始，肝細(xì)胞中可見一些小的脂滴，核移向細(xì)胞的

7、一側(cè)，核仁明顯。隨著魚苗的生長，細(xì)胞內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體豐富，脂滴變大并充滿大部分細(xì)胞質(zhì)，核移向細(xì)胞的邊緣。胰臟為彌散型，主要位于膽囊周圍，沿肝門靜脈和膽管侵入肝臟并一直延伸到中腸后部，具有豐富的胰管。胰腺由外分泌部和內(nèi)分泌部兩部分組成，外分泌部分占據(jù)著胰腺的大部并環(huán)繞著內(nèi)分泌部分，形成球形或卵圓形。胰島細(xì)胞著色淺，細(xì)胞排列疏松，胰管由單層立方上皮組成。胰腺按腺泡結(jié)構(gòu)排列，每個腺泡細(xì)胞細(xì)長，由嗜堿性細(xì)胞質(zhì)、嗜酸型酶原顆粒和基部的細(xì)胞核組

8、成，核仁清晰。 研究了新開發(fā)的微顆粒飼料(Diet1～Diet3)、混合飼料(冷藏橈足類和Diet3)與冷藏橈足類(對照組)對25～60日齡大黃魚仔稚魚消化酶活力、腸道和肝臟顯微結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果顯示，35和60日齡時，微顆粒飼料組魚苗間的胰蛋白酶活力差異不顯著，但均高于25日齡，而混合組和對照組無顯著變化。除對照組魚苗35日齡的胰淀粉酶活力顯著高于25和60日齡外，其它各組均無顯著差異。隨著魚苗的生長，除混合組和對照組外，各組間

9、魚苗堿性磷酸酶和氨肽酶活力均逐漸升高。組織學(xué)結(jié)果顯示，混合組35日齡魚苗前中腸粘膜上有大量脂滴，而其它各組魚苗則沒有。微顆粒飼料組魚苗腸粘膜褶皺比混合組和對照組多且深，直腸細(xì)胞中可見脂滴積累，而對照組魚苗直腸幾乎沒有褶皺，并缺乏脂滴。微顆粒飼料組魚苗肝細(xì)胞內(nèi)有大量脂滴，核移向細(xì)胞一側(cè)?；旌辖M魚苗35日齡時肝細(xì)胞內(nèi)也有脂滴，但數(shù)量在60日齡時減少。對照組大黃魚苗肝臟中可見類似于饑餓狀態(tài)的胞間隙、細(xì)胞質(zhì)塌陷和胞核固縮。以上結(jié)果表明，合適的微

10、顆粒飼料可促進(jìn)大黃魚仔稚魚消化道的正常發(fā)育。 研究了飼料中不同蛋白和淀粉水平對12～42日齡大黃魚仔稚魚成活率、生長及胰淀粉酶和蛋白酶活力的影響。以冷藏橈足類為對照組，通過調(diào)整白魚粉、水解酪蛋白和淀粉等含量制成5種蛋白梯度依次為47.1[％]、52.0[％]、57.1[％]、62.2[％]和67.5[％],淀粉梯度相應(yīng)為26.10[％]、19.85[％]、13.60[％]、7.35[％]和1.10[％]的等能(16.65MJ/k

11、g)的微粘合飼料。每處理3個重復(fù),每白色塑料桶(180-1)內(nèi)放3500尾初始體重為1.76士0.09 mg的12日齡大黃魚魚苗。養(yǎng)殖實驗至42日齡結(jié)束,共持續(xù)30天。結(jié)果顯示,魚苗的成活率和特定生長率隨飼料蛋白水平的升高而顯著升高,在57.1[％]蛋白水平時達(dá)到最高,之后則呈下降趨勢。對照組與62.2[％]蛋白組魚苗的成活率差異不顯著,但生長較慢,僅高于47.1[％]蛋白組。47.1[％]和52.0[％]蛋白組魚苗的體蛋白含量顯著低于

12、57.1[％]以上蛋白組。與蛋白變化相反,47.1[％]蛋白組魚苗的體脂肪含量則顯著高于57.1[％]以上蛋白組。此外,對照組魚體蛋白和脂肪最低,而灰分最高。整個實驗期間,淀粉酶活力隨飼料中淀粉水平的升高而升高,但魚苗42日齡之前的胰蛋白酶活力差異不顯著,表明在飼料誘導(dǎo)酶合成的調(diào)節(jié)方面,胰蛋白酶晚于淀粉酶。 定性研究了大黃魚仔稚魚氨基酸需要量。測定了大黃魚仔稚魚的成活率和特定生長率(SGR),分析了輪蟲、豐年蟲無節(jié)幼體和橈足類3

13、種生物餌料和0～35日齡大黃魚體粗蛋白和氨基酸含量,并比較了大黃魚苗及其餌料的A/E值以評估餌料中氨基酸的不平衡性。結(jié)果顯示,實驗結(jié)束時取樣池魚苗的成活率為10.8[％],與其它育苗池魚苗的成活率基本一致。4～12日齡魚苗SGR較低(10.0[％]/天),12～25日齡魚苗SGR較高(SGR:17.1[％]/天),之后又下降(11.10/0/天)。生物餌料中蛋白含量相近,在55.3～57.8[％]之間。但魚苗剛孵出時體蛋白含量為40.8

14、[％],4日齡時僅為29.6[％],12日齡之前變化不大(35.9[％]),之后又逐漸升高,到25日齡時達(dá)到最高(67.4[％]),之后則稍微下降到較穩(wěn)定水平(60.1～61.6[％])。隨著魚苗的生長,其氨基酸、必需氨基酸和非必需氨基酸總量與體蛋白的變化相似。餌料和魚苗的氨基酸組成中,主要的必需氨基酸和非必需氨基酸均為精氨酸、亮氨酸、賴氨酸和纈氨酸,及天冬氨酸和谷氨酸。比較魚苗與其餌料的A/E值,組氨酸為輪蟲飼養(yǎng)期魚苗的第一限制性氨基

15、酸,而蛋氨酸為豐年蟲無節(jié)幼體和橈足類飼養(yǎng)期魚苗的第一限制性氨基酸。以上結(jié)果表明餌料中氨基酸組成并不能滿足大黃魚早期的營養(yǎng)需要。 研究了12～42日齡大黃魚仔稚魚蛋氨酸需要量。以白魚粉、烏賊粉和磷蝦粉作蛋白源并通過添加L-晶體氨基酸使其中的必需氨基酸與大黃魚卵的必需氨基酸組成一致(蛋氨酸除外)，制成6種等氮(8.8％氮)等能(16.65KJg<'-1>)的微粘合飼料。L-蛋氨酸梯度依次為飼料的1.19％、1.62％、2.18％、2

16、.65％、3.13％和3.66％，或飼料蛋白的2.17％、2.95％、3.95％、4.81％、5.70％和6.65％。以豐年蟲無節(jié)幼體和橈足類作對照組。每處理設(shè)3個重復(fù)，每藍(lán)色塑料桶(180-1)內(nèi)放3500尾初始體重為1.93土0.11 mg的12日齡大黃魚魚苗為1重復(fù)。養(yǎng)殖實驗至42日齡結(jié)束，共持續(xù)30天。結(jié)果顯示，大黃魚魚苗的成活率隨飼料蛋氨酸水平的升高而升高，在2.18％蛋氨酸水平時達(dá)到最高，之后則無顯著變化。特定生長率隨飼料蛋

17、氨酸水平的升高而升高，在2.18％蛋氨酸水平時達(dá)到最高，之后則呈下降趨勢。對照組魚苗的成活率和特定生長率最高，均顯著高于蛋氨酸處理組。各組間魚苗體脂肪和灰分差異不顯著，但體蛋白隨飼料蛋氨酸水平的升高而升高，在2.65％蛋氨酸水平時達(dá)到最高，之后則稍微下降，對照組魚體蛋白顯著高于蛋氨酸處理組。對照組魚體的各必需氨基酸含量均顯著高于其它各處理組。經(jīng)二次多項式模型分析，12～42日齡大黃魚苗的適宜蛋氨酸需要量為飼料的2.58％或飼料蛋白的4.