抗敏止癢植物組合提取物制備工藝、功效及作用途徑研究.pdf

1、本課題組前期對(duì)具有抗敏止癢功效的植物進(jìn)行過大量的篩選工作，在此基礎(chǔ)上本論文從抗敏、止癢、修復(fù)途徑出發(fā)，通過多種功效評(píng)價(jià)方法，從10種植物提取物中篩選出功效最佳的仙人掌、苦參和麥冬提取物，并進(jìn)行組合提取，得到三種植物組合提取物。運(yùn)用分析化學(xué)、藥理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等手段闡明了組合提取物的抗敏活性物質(zhì)基礎(chǔ)、抗敏功效、安全性及其作用途徑。旨在開發(fā)出可應(yīng)用于護(hù)膚品中的天然抗敏植物原料，也為其應(yīng)用提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。主要研究內(nèi)容如下:
　　

2、將前期篩選的10種具有一定抗敏止癢功效的植物分別進(jìn)行提取，得到10種提取物凍干粉。通過透明質(zhì)酸酶體外抑制試驗(yàn)快速判定10種植物提取物抗敏效果;通過磷酸組胺致豚鼠皮膚瘙癢試驗(yàn)判定10種植物提取物的止癢效果;通過皮膚刺激修復(fù)試驗(yàn)判定10種植物提取物對(duì)皮膚的修復(fù)效果。從中篩選出透明質(zhì)酸酶活性抑制率最高的米邦塔仙人掌提取物，對(duì)磷酸組胺所致豚鼠皮膚瘙癢的抑制作用最強(qiáng)的苦參提取物，對(duì)皮膚刺激修復(fù)作用最佳的麥冬提取物。
　　從抗敏、止癢、修復(fù)三

3、個(gè)途徑入手解決皮膚過敏問題，將三種提取物組合提取，通過均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)，優(yōu)選出最佳配比，即仙人掌∶苦參∶麥冬為7∶1∶3，為使工藝相對(duì)簡(jiǎn)單和操作方便，利于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，采用活性炭脫色法和樹脂吸附離子的方法進(jìn)行工藝優(yōu)化研究，制備工藝如下:苦參和麥冬分別粗粉碎，過20目篩，取5g苦參和15g麥冬溶解于1100mL去離子水中，加熱至90℃攪拌提取1h，降溫至50℃，再加入35g仙人掌粉，保溫?cái)嚢杼崛?h，冷卻至室溫。將提取液100目濾網(wǎng)粗濾后，

4、5000 r·min-1離心10min，取上清液，上清液過0.8μm孔徑紙板精濾，得到澄清透亮精濾液。精濾液經(jīng)過活性炭脫色后（活性炭添加量為1.0％、脫色溫度為80℃、脫色時(shí)間為0.5h），過活化好的離子交換樹脂（陽離子001×7，陰離子樹脂D309），將去離子后的料液收集，濃縮，制備成凍干粉。測(cè)定凍干粉中的活性成分含量，其中多糖含量為634.6mg·g-1，蛋白含量為38.4mg·g-1，多酚含量為56.8mg·g-1，氧化苦參堿含量

5、為4.98mg·g-1，苦參堿含量為3.12mg·g-1，多糖為組合提取物的主要成分。
　　通過透明質(zhì)酸酶活性抑制試驗(yàn)，驗(yàn)證了同濃度下的組合提取物比單一的各組分提取物抗敏效果更佳。采用豚鼠磷酸組胺致癢反應(yīng)試驗(yàn)、低分子右旋糖酐誘發(fā)小鼠皮膚瘙癢試驗(yàn)和小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)，綜合評(píng)價(jià)了組合提取物的抗敏功效。組合提取物高劑量與氟輕松組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，這表明組合提取物能減輕磷酸組胺對(duì)皮膚造成的瘙癢癥狀，具有一定的止

6、癢功效;組合提取物3個(gè)劑量組都能減少低分子右旋糖酐致小鼠瘙癢發(fā)作次數(shù)、延長潛伏時(shí)間，高劑量組與模型組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（**p＜0.01）;小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響實(shí)驗(yàn)同樣表明，與模型組相比較，氟輕松軟膏、組合提取物高劑量組對(duì)降低毛細(xì)血管的通透性有顯著作用（*P＜0.05），能大大降低皮膚紅腫癥狀的表現(xiàn)程度，具有一定的抗敏功效。
　　采用紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)、BCOP試驗(yàn)和人體斑貼試驗(yàn)對(duì)組合提取物進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)結(jié)

7、果表明，組合提取物在一般化妝品配方中添加的濃度范圍(1％)下，溶血率均小于5％，說明組合提取物溫和無刺激，安全性高，低濃度和高濃度下都可在護(hù)膚品中安全添加;BCOP試驗(yàn)和人體斑貼試驗(yàn)可以看出，組合提取物對(duì)牛角膜和人體皮膚無任何刺激性，涂抹含有組合提取物的乳液后，還能減弱刺激源對(duì)皮膚所造成的損傷，在一定程度上保護(hù)表皮細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整性及屏障功能，提高皮膚的耐受性，真正具有修復(fù)受損肌膚減輕過敏癥狀的功效。同時(shí)也對(duì)組合提取物化妝品配方劑型的應(yīng)用

8、進(jìn)行了研究，得到了不同劑型的護(hù)膚品的配方及制備工藝。
　　在具有抗敏止癢功效及安全性保障前提之下，對(duì)組合提取物的抗敏途徑及作用機(jī)理進(jìn)行了探究。通過DPPH自由基清除試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)組合提取物能夠清除自由基，減弱自由基對(duì)人體嗜堿細(xì)胞和肥大細(xì)胞細(xì)胞膜的破壞，從而間接降低組胺的釋放量，起到抗敏止癢的功效。TEWL試驗(yàn)結(jié)果表明，組合提取物能提升皮膚屏障功能，降低皮膚中水分的散失量，從而在一定程度上能提升皮膚的自我保護(hù)能力，降低敏感程度。經(jīng)成分分

9、析，組合提取物中多糖成分主要起到減少水分散失，增強(qiáng)屏障功能的效果。
　　建立了PMA和A23187聯(lián)合誘導(dǎo)KU812細(xì)胞組胺釋放模型，用來評(píng)價(jià)提取物對(duì)組胺釋放的影響，結(jié)果表明，經(jīng)PMA和A23187聯(lián)合誘導(dǎo)后，模型對(duì)照組組胺含量明顯升高，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異（**p＜0.01）。KU812細(xì)胞經(jīng)組合提取物處理后，組胺含量明顯降低，高、中、低劑量組抑制率分別為45.23％、39.91％和33.45％，這表明組合提取物能通過抑

10、制組胺的釋放量，從而減輕過敏癥狀，起到抗敏的功效。
　　采用PMA聯(lián)合鈣離子載體誘導(dǎo)方法建立KU812細(xì)胞脫顆粒體外模型，結(jié)果顯示，經(jīng)PMA和A23187誘導(dǎo)后，KU812細(xì)胞釋放TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8促炎細(xì)胞因子，使用組合提取物干預(yù)后，高、中、低劑量的組合提取物均可顯著下調(diào)TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的表達(dá)水平，且呈劑量依賴性。說明組合提取物可以通過抑制組胺和一系列促炎因子的釋放，從而減輕過敏反