納豆激酶分離純化工藝與緩釋片劑的研究.pdf

1、本課題以新一代溶栓物質(zhì)納豆激酶為模型藥物，對納豆激酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)、緩釋片的制備及其穩(wěn)定性進行了系統(tǒng)研究。 采用TAME法作為納豆激酶活性的測定方法，操作簡單、快速，在納豆激酶的濃度范圍為0.015-0.25mg/ml內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度較高，重現(xiàn)性好。 對納豆激酶的分離純化進行了研究，納豆激酶發(fā)酵液的粗提物經(jīng)Superdex 75凝膠層析和PAGE電泳純化，可得到納豆激酶的純品，經(jīng)SDS-PAGE電泳檢驗為單一

2、色帶，分子量為28kDa。 研究了納豆激酶的酶學(xué)性質(zhì)，在30℃以下，納豆激酶的活性能較好地保持，當(dāng)溫度高于40℃時，酶活開始下降，表明溫度對納豆激酶的活性有顯著影響；納豆激酶的最適穩(wěn)定pH為6-10，而在pH<4時，納豆激酶很容易失活，表明納豆激酶在酸性條件下不穩(wěn)定。 考察了影響納豆激酶酶促反應(yīng)動力學(xué)的因素，納豆激酶以TAME為底物時的米氏常數(shù)(Km)為35.47mmol/L，最適反應(yīng)溫度為37℃，最適反應(yīng)pH為8.0。

3、 本課題選用HPMC、骨架材料A為骨架材料制備了能在體外持續(xù)釋放12h的納豆激酶緩釋片，對影響緩釋片釋放的因素：骨架材料和稀釋劑的種類及用量進行了考察。通過正交試驗設(shè)計對處方進行優(yōu)化，得到了優(yōu)選處方。體外釋放機理研究結(jié)果表明，納豆激酶緩釋片的體外釋放行為符合威布爾方程。 納豆激酶緩釋片穩(wěn)定性影響因素試驗表明，強光照射對納豆激酶緩釋片無顯著影響；高濕度會導(dǎo)致片劑外觀的改變和釋放度的變化。加速試驗(25℃)表明，25℃長期儲

4、藏會影響納豆激酶緩釋片的釋放度和活性，提示納豆激酶緩釋片宜低溫保存。研究表明，納豆激酶原料的臨界相對濕度為82.30％，納豆激酶緩釋片的臨界相對濕度為83.63％，確定了納豆激酶生產(chǎn)和儲藏的濕度條件。 本課題對新型溶栓物質(zhì)——納豆激酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)、緩釋片的制備及其穩(wěn)定性進行了系統(tǒng)研究，目前尚未見關(guān)于納豆激酶口服緩釋制劑的報道。本課題的研究結(jié)果為納豆激酶緩釋片的進一步開發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)，同時也為生物技術(shù)藥物口服緩釋制劑的